[发明专利]一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法

权利要求书

1.一种快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：包括步骤如下：

a）反应Ⅰ：将一定量的临床样品与试剂Ⅰ接触，所述试剂Ⅰ含有用于检测ATP的组分；

b）反应Ⅱ：取与反应Ⅰ中等量的临床样品与试剂Ⅱ接触，而所述的试剂Ⅱ除了含有足量的与反应Ⅰ中成分相同的用于检测样品中ATP的组分外，还含有能够通过人体中所不存在的ATP生成酶产生ATP的组分；

c）温育：将步骤a）和步骤b）中配制的反应混合物，分别在相同的温育条件下进行温育一段时间；

d）测算信号比：分别测定经步骤c）温育后的反应Ⅰ和反应Ⅱ中能够反映ATP浓度的光信号，并计算反应Ⅰ信号与反应Ⅱ信号的比值或净信号，并通过信号比或净信号来判断样品中是否存在肺炎支原体。

2.根据权利要求1所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：还包括样品洗脱步骤，即将所述临床样品在与试剂Ⅰ或试剂Ⅱ接触前经过含有非离子洗涤剂的样品缓冲液进行洗脱处理，所述非离子洗涤剂的浓度可引起细胞膜的溶解或穿孔但不会引起细菌细胞壁的溶解或穿孔。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：所述的临床样品包括从患者咽喉收集的样品、痰液或从疑似肺炎支原体感染患者的肺部采集的样品。

4.根据权利要求1所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：步骤a）、b）中，所述用于检测ATP的组分和产生ATP的组分均为能够基于荧光素酶产生生物化学发光的试剂。

5.根据权利要求1或4所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：步骤a）、b）中，所述用于检测ATP的组分包括荧光素酶、荧光素、镁离子、DTT、辅酶A和缓冲系统。

6.根据权利要求5所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：所述荧光素酶为萤火虫荧光素酶；所述镁离子选用为醋酸镁溶液或氯化镁溶液；所述缓冲系统由0.5％BSA和pH=7.5的HEPES组成。

7.根据权利要求5或6所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：所述用于检测ATP的组分中各物质的最终浓度为萤火虫荧光素酶20mg/L、荧光素30mg/L、镁离子溶液10mM、DTT 5mM、辅酶A 0.5mM、缓冲系统10mM。

8.根据权利要求1所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：所述人体中所不存在的ATP生成酶包括乙酸激酶、氨基甲酸激酶、丙酮酸磷酸二激酶或三者的任意组合。

9.根据权利要求1所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：所述试剂Ⅰ和试剂Ⅱ中均含有人细胞ATP生成酶的专一抑制剂。

10.根据权利要求1所述的快速检测临床样本中存在肺炎支原体的方法，其特征在于：步骤c）中，所述温育的温度为10～40℃，所述温育时间为小于30min。