[发明专利]液液萃取净化-高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B1的方法

说明书

本发明公开了液液萃取净化‑高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B₁的方法，样品提取液经液液萃取净化、浓缩及定容后，用柱后碘衍生‑高效液相色谱检测，建立一种简单快速的测定食品中黄曲霉毒素B₁的新方法，利用该法对花生、玉米及黄豆等8种样品进行验证，结果证明本方法无明显杂质干扰，并且准确性和重复性良好。该方法与传统高效液相色谱法测定黄曲霉毒素B₁相比：操作方便，灵敏度好，准确性高，成本低廉，可推广用于食品中黄曲霉毒素B₁的检测。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种液液萃取净化-高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B₁的方法。

背景技术

黄曲霉毒素是一类由黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的代谢产物，目前发现的有20多种，确定结构的有17种。黄曲霉毒素极易污染粮油及其制品，如花生、花生油、玉米及大米等，在众多的黄曲霉毒素中以黄曲霉毒素B₁分布最为广泛，并且是毒性最强的一种，被确认为I类致癌物。因此，大多数的国家都非常重视黄曲霉毒素B₁的防控，并制定食品中黄曲霉毒素B₁的限量标准。

目前食品中黄曲霉毒素B₁常用的检测方法有：薄层色谱法(TLC)、酶联免疫法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)及液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)等等。TLC是检测黄曲霉毒素B₁的经典方法，但其前处理繁琐，易受杂质干扰并且定量起来较为困难。ELISA法检测过程比较简便，但有可能产生假阳性或假阴性结果，检测的准确度有待提高。HPLC-MS法检测结果准确，检出限低，但仪器价格昂贵，不易普及。因此目前通常采用HPLC法测定黄曲霉毒素B₁。

HPLC法测定黄曲霉毒素B₁的过程中，为了排除提取液中的杂质对分离和检测的干扰，需要采用免疫亲和柱或者专用固相萃取柱净化，成本较高。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种液液萃取净化-高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B₁的方法，建立了一种操作方便，灵敏度好，准确性高的黄曲霉毒素B₁高效液相色谱检测方法。

本发明采取的技术方案为：

液液萃取净化-高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B₁的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)采用乙腈-水混合溶液提取食品试样中的黄曲霉毒素B₁，得到提取液；

(2)配制一系列不同质量浓度的黄曲霉毒素B₁标准溶液，以甲醇-乙腈-水作为流动相，利用等度洗脱柱后碘衍生-高效液相色谱法测定各黄曲霉毒素B₁标准溶液的峰面积，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

(3)采用与步骤(2)同样的条件测定提取液的峰面积，根据外标法定量检测出食品试样中黄曲霉毒素B₁的浓度。

进一步地，所述柱后碘衍生-高效液相色谱法的测试条件为：Shim-pack GISTC18色谱柱；体积比为15:20:65的甲醇：乙腈：水为流动相；流动相流速1.0mL/min；柱温40℃；进样量50μL。

柱后碘衍生-高效液相色谱法中，柱后衍生系统的衍生溶液为0.05％碘溶液；衍生溶液流速0.2mL/min；衍生反应管温度70℃；荧光检测器的激发波长360nm、发射波长440nm。

所述步骤(1)具体包括以下步骤：

(1-1)将食品试样在乙腈和水的混合溶液中进行超声提取，再向提取液中加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液除去食品试样中的蛋白质；