[发明专利]液液萃取净化-高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B1的方法

权利要求书

1.液液萃取净化-高效液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B₁的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)采用乙腈-水混合溶液提取食品试样中的黄曲霉毒素B₁，得到提取液；

(2)配制一系列不同质量浓度的黄曲霉毒素B₁标准溶液，以甲醇-乙腈-水作为流动相，利用等度洗脱柱后碘衍生-高效液相色谱法测定各黄曲霉毒素B₁标准溶液的峰面积，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

(3)采用与步骤(2)同样的条件测定提取液的峰面积，根据外标法定量检测出食品试样中黄曲霉毒素B₁的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述柱后碘衍生-高效液相色谱法的测试条件为：Shim-pack GIST C18色谱柱；体积比为15:20:65的甲醇：乙腈：水为流动相；流动相流速1.0mL/min；柱温40℃；进样量50μL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：柱后碘衍生-高效液相色谱法中，柱后衍生系统的衍生溶液为0.05％碘溶液；衍生溶液流速0.2mL/min；衍生反应管温度70℃；荧光检测器的激发波长360nm、发射波长440nm。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)具体包括以下步骤：

(1-1)将食品试样在乙腈和水的混合溶液中进行超声提取，再向提取液中加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液除去食品试样中的蛋白质；

(1-2)将步骤(1-1)处理后的样品溶液分别先后经正己烷萃取、三氯甲烷萃取；

(1-3)步骤(1-2)所得萃取液经浓缩、定容、过滤，即可得到提取液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤(1-1)中，乙腈和水的体积之比为50：50～90:10；亚铁氰化钾溶液的质量浓度为85～100g/L；乙酸锌溶液的质量浓度为170～200g/L。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤(1-1)中，乙腈和水的体积之比为85：15；亚铁氰化钾溶液的质量浓度为92g/L；乙酸锌溶液的质量浓度为183g/L。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)具体包括以下步骤：

(1-1)将5g食品试样分散在10.0mL乙腈和水的混合溶液中，涡旋混匀1min，水浴超声30min，冷却至室温后，加入2mL亚铁氰化钾溶液和2mL乙酸锌溶液，混匀后静置10min，离心，收集上清液，向离心所得残渣中加入5.0mL乙腈和水的混合溶液中，重复此步骤提取一次，合并上清液，并加入乙腈定容至25mL；

(1-2)准确吸取5.0mL步骤(1-1)得到的上清液，加入5mL正己烷，涡旋2min后，分离得到上层溶液和下层溶液，取下层溶液加入5mL三氯甲烷，充分涡旋3min，于5000r/min离心10min，收集三氯甲烷层溶液；再重复此步骤萃取一次，合并三氯甲烷层溶液；

(1-3)将三氯甲烷层溶液于60℃水浴中氮吹至干，并以流动相复溶并定容至1.0mL，并0.22μm滤膜过滤，即可得到提取液。

8.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，以流动相将黄曲霉毒素B₁标准溶液逐级稀释得到0.1ng/mL、0.5ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL和50.0ng/mL的系列标准溶液。

9.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述标准曲线的标准方程为y＝74178.3x-7972.1，拟合系数为0.99997，其中，y为峰面积，x为黄曲霉毒素B₁的浓度，单位为ng/mL。

10.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：所述方法的检测限为0.02μg/kg。