[发明专利]一种用于鉴别鹿角的荧光PCR检测方法

权利要求书

1.一种用于鉴别鹿角的荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测鹿角的基因DNA为模板，采用引物探针组合物进行荧光PCR，根据是否出现扩增曲线以及扩增曲线的Ct值大小进行判定待测样品是否为正品鹿角或是否含有正品鹿角成分；

其中，所述引物探针组合物包括：引物F1、引物R1、探针P1；所述引物F1为如SEQ ID No.1所示序列的单链DNA分子；所述引物R1为如SEQ ID No. 2所示序列的单链DNA分子；所述探针P1为如SEQ ID No. 3所示序列的单链DNA分子；

所述探针P1由荧光基团和荧光淬灭基团修饰；其中，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、JOE、ROX、Cy5，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA；荧光PCR采用的反应体系为：2×TaqMan Master Mix10μL，引物F1、引物R1、探针P1各0.5μL，DNA模板2μL，双蒸水6.5μL；各引物、探针在反应体系中的浓度均为250nM，DNA模板在反应体系中的浓度为5 ng/μL；所述方法还设置阳性对照、阴性对照以及空白对照；荧光PCR扩增程序为：94℃ 预变性5分钟，94℃变性45秒，60℃ 退火45秒，72℃ 延伸45秒，共30个循环；

还包括对待测样本进行精确定量的步骤，其包括：分别计算正品鹿角的标准质粒DNA拷贝数；将正品鹿角标准质粒DNA分别按10×逐级稀释5个梯度；以标准品为模板，进行实时荧光PCR检测，生成标准曲线，应用所述标准曲线对未知待测样本进行精确定量；

所述正品鹿角为马鹿和/或梅花鹿，伪品鹿角包括18种鹿科动物、猪、牛以及羊，所述18种鹿科动物包括白唇鹿、水鹿、坡鹿、泽鹿、麋鹿、黇鹿、斑鹿、豚鹿、毛冠鹿、小麂、赤麂、黑麂、驯鹿、驼鹿、狍子、白尾鹿、黑尾鹿以及獐。

2.根据权利要求1所述的用于鉴别鹿角的荧光PCR检测方法，其特征在于，结果判定具体为：若待测样品具有扩增曲线，并且Ct值25，说明待测样品为正品鹿角或含有正品鹿角成分；若待测样品不具有扩增曲线，说明待测样品为伪品鹿角。

3.根据权利要求1所述的用于鉴别鹿角的荧光PCR检测方法，其特征在于，所述梅花鹿、马鹿样品的起始DNA拷贝数分别为2.42×10¹¹copies/μL和1.82×10¹⁰copies/μL；所述梅花鹿、马鹿样品的最低检测限分别为7.680×10⁷copies/μL和8.494×10⁷copies/μL。