[发明专利]靶向三阴性乳腺癌的纳米粒子掺杂RNA水凝胶的制备及应用

说明书

本发明公开了一种靶向三阴性乳腺癌的纳米粒子掺杂RNA水凝胶的制备及应用，RNA水凝胶为纯RNA体系，通过滚环转录的方式形成，该转录过程产生了大量的GC键，为DOX的引入提供了大量的位点，通过滚环复制产生的大量RNA副本结构是一个聚阴离子聚集体，鉴于其强的电负性，我们引入了具有正电性的MnO₂@Ce6纳米粒子，聚阴离子水凝胶可以稳定胶体阳离子MnO₂@Ce6粒子，由此靶向进入乳腺癌细胞中协同治疗。可用于药物缓释体系，生物相容性较好，对靶向性细胞MDA‑MB‑231肿瘤细胞的抑制生长作用及抑制癌症转移复发等领域具有广阔前景。

技术领域

本发明涉及生物化学纳米材料技术领域，具体涉及一种靶向三阴性乳腺癌的纳米粒子掺杂RNA水凝胶的制备及应用，实现多重协同、增益治疗三阴性乳腺癌。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的癌症之一，三阴性乳腺癌(TNBCs)指的是乳腺癌的一种缺乏表达雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体2(HER2)类型。临床研究证明TNBCs较其他类型的乳腺癌是最具侵略性的一种乳腺癌，其预后不良，死亡率和转移倾向更为难以控制。传统疗法包括激素治疗，靶向治疗三个受体，但治疗效果差强人意。因此，更有效的发展TNBCs诊断和联合疗法是紧迫和重要。

microRNA-205的异位表达可以减少体外细胞增殖，通过靶向抑制E2F1和LAMC1抑制体内肿瘤生长，其中E2F1是细胞周期调节因子，LAMC1是参与细胞粘附、增殖和迁移的细胞外基质相关。microRNA-182通过精确抑制Palladin蛋白的表达来影响细胞运动性和乳腺癌细胞的转移。研究表明，microRNA在癌症治疗中具有统计学意义，但单个microRNA的预后效果并不理想。

二氧化锰可以与肿瘤微环境中内源的过氧化氢或谷胱甘肽分解产生氧气，产生的锰离子可以轻易被排除体外，不会滞留在身体里影响机体健康，同时，产生的氧气可用作于增强光动力治疗，在进行光动力治疗时，外源激光会促进DOX从水凝胶上卸载，短时间内就可以在细胞核内聚集，从而快速杀死肿瘤细胞。

核酸适体，是使用的厦门大学杨朝勇课题组通过筛选选出来的适体。与MDA-MB-231细胞表面受体特异性结合，从而实现靶向给药。在后续实验工作中作为对照组而构建的RNA基因纳米探针，也具有一定的靶向治疗作用。

胆固醇(Chol)，具有疏水性，可以促进RNA的转录副本形成纳米结构，同时也增强了结构的稳定性。

目前亟需研究一种新兴的仅由RNA分子自组装的高效治疗三阴性乳腺癌的水凝胶及其制备方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：提供一种仅由RNA分子自组装的具有高效，毒副性较低，生物相容性较好等优点的水凝胶作为载体，携带多种治疗性药物靶向进入三阴性乳腺癌。

本发明的技术方案为：

用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA水凝胶载体，包括：

(1)由直链DNA转录模板通过滚环转录形成的RNA水凝胶，

(2)RNA水凝胶上具有治疗型基因microRNA-182和microRNA-205。

进一步地，所述直链DNA转录模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。

RNA水凝胶载体的制备方法，首先设计直链DNA转录模板，直链DNA转录模板中设计了microRNA-182和microRNA-205的反义序列，通过滚环转录的方式形成纯RNA体系的水凝胶载体。

进一步地，具体步骤如下：

(1)直链DNA转录模板与T7启动子以相同浓度进行退火处理；