[发明专利]靶向三阴性乳腺癌的纳米粒子掺杂RNA水凝胶的制备及应用

权利要求书

1.用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA水凝胶载体，其特征在于，包括：

(1)由直链DNA转录模板通过滚环转录形成的RNA水凝胶，

(2)RNA水凝胶上具有治疗型基因microRNA-182和microRNA-205。

2.根据权利要求1所述的RNA水凝胶载体，其特征在于，所述直链DNA转录模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。

3.权利要求1或2所述的RNA水凝胶载体的制备方法，其特征在于，首先设计直链DNA转录模板，直链DNA转录模板中设计了microRNA-182和microRNA-205的反义序列，通过滚环转录的方式形成纯RNA体系的水凝胶载体。

4.权利要求1或2所述的RNA水凝胶载体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)直链DNA转录模板与T7启动子以相同浓度进行退火处理；

(2)加入T4连接酶及T4连接酶缓冲液，19℃维持13h，形成RNA转录模板；

(3)加入T7聚合酶，rNTP，T7聚合酶缓冲液及TM缓冲液在37℃下维持5h，形成多副本的RNA水凝胶载体。

5.用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA水凝胶复合物，其特征在于，包括：

(1)由直链DNA转录模板通过滚环转录形成的RNA水凝胶；

(2)RNA水凝胶上具有治疗型基因microRNA-182和microRNA-205；

(3)RNA水凝胶上具有核酸适体、CpG片段和DOX；

(4)通过静电作用粘连的胶体MnO₂@Ce6阳离子纳米粒子。

6.根据权利要求5所述的RNA水凝胶复合物，其特征在于，所述直链DNA转录模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。

7.根据权利要求5所述的RNA水凝胶复合物，其特征在于，核酸适体为靶向MDA-MB-231细胞的核酸适体，其序列为SEQ ID No.5所示的核苷酸序列且5’端修饰有Fam基团、3’端修饰有胆固醇；CpG片段为SEQ ID No.3所示核苷酸序列且5’端修饰有Fam基团、3’端修饰有胆固醇。

8.权利要求5-7任一项所述的RNA水凝胶复合物的制备方法，其特征在于，首先设计直链DNA转录模板，直链DNA中设计了microRNA-182和microRNA-205的反义序列，通过滚环转录的方式形成纯RNA体系的水凝胶载体，加入CpG片段、核酸适体和DOX，离心形成RNA三螺旋水凝胶，然后加入胶体MnO₂@Ce6阳离子纳米粒子，得到磁性RNA水凝胶复合物。

9.根据权利要求8所述的RNA水凝胶复合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)取直链DNA转录模板与T7启动子以相同浓度进行退火处理；

(2)加入T4连接酶及T4连接酶缓冲液，19℃维持13h，形成RNA转录模板；

(3)加入T7聚合酶，rNTP，T7聚合酶缓冲液及TM缓冲液在37℃下维持5h，形成多副本的RNA水凝胶载体；

(4)将步骤(3)得到的RNA水凝胶载体、TM缓冲液、CpG片段及核酸适体在65℃下维持5min，缓慢降至25℃，在4℃冰箱中放置2h，37℃下与DOX混合2h后，高速离心，形成RNA三螺旋水凝胶；然后与胶体MnO₂@Ce6阳离子纳米粒子常温静置15min，得到RNA水凝胶复合物。

10.权利要求1或2所述的RNA水凝胶载体或权利要求5-7任一项所述的RNA水凝胶复合物在制备治疗三阴性乳腺癌相关药物中的应用。