[发明专利]一种环境因子对钉螺酶活力影响的实验方法

说明书

本发明公开了一种环境因子对钉螺酶活力影响的实验方法，收集钉螺软体组织并称重；将软体组织放入离心管中，并置入液氮内，在‑80℃冰箱保存；采用ELISA法在不同环境温度、pH值和盐度调节下分别测定软体组织HK和LDH活力，通过模拟自然环境，测定钉螺在不同环境因子作用下HK和LDK活力的变化，从而更好地防治钉螺。

技术领域

本发明属于钉螺防治技术领域，尤其涉及一种环境因子对钉螺酶活力影响的实验方法。

背景技术

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术至少存在以下问题：

湖北钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主，在血吸虫的防治中扮演着重要的角色。环境条件缺氧或者动物机体本身代谢过于旺盛但氧气供应不足情况下，机体主要通过糖酵解作用提供能量，己糖激酶(HK)是糖酵解过程中重要的变构调节酶，催化不可逆反应，对糖酵解有重要调节作用,乳酸脱氢酶(LDH)是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种通过模拟自然环境，测定钉螺在不同环境因子作用下HK和LDK活力的变化，从而更好地研究钉螺的环境因子对钉螺酶活力影响的实验方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种环境因子对钉螺酶活力影响的实验方法，

收集钉螺软体组织并称重；将软体组织放入离心管中，并置入液氮内，在 -80℃冰箱保存；采用ELISA法在不同环境温度、pH值和盐度调节下分别测定软体组织HK和LDH活力。

试剂采用己糖激酶和乳酸脱氢酶酶联免疫分析试剂盒。

在冰盘上压碎并剔除螺壳；取软体组织用滤纸吸干组织外水分，收集软体组织并称重，放入1.5ml离心管中，并置入液氮内，在-80℃超低温冰箱保存，备用。

测定酶活力时，取0.05g组织，加入0.45ml PBS缓冲液，在冰水浴中充分碾磨软体组织，碾磨后用台式低温高速离心机以3500r/min离心，10分钟后取上清液，制成10％组织匀浆后分装备用。

按照HK和LDH酶联免疫分析试剂盒上的步骤进行操作，依序读取各孔的吸光度值，将样品的吸光度值带入标准曲线直线回归方程，计算出样品的浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的试剂浓度。

数据分析采用SPSS18.0统计软件，结果以来表示，各组间数据两样本均数的比较采用t检验，多个样本均数比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

实验用水为天然江水，不同温度对钉螺HK活力的影响有统计学意义，HK 活力在1℃～40℃温度范围内，随温度的上升呈先上升后下降的趋势，温度为 28℃时酶活力最高，随着温度升高，钉螺HK活力增强，温度进一步升高，HK 的活力逐渐降低；LDH的活力在各温度水平之间的差异有统计学意义，在1℃～ 40℃温度范围内，LDH的活力随温度上升呈先上升后下降再上升的变化规律，但总体呈上升趋势，表明随着温度升高，钉螺体内无氧呼吸增强。

实验用水为天然江水，在20℃温度下，随着pH值升高，HK活力总体呈下降趋势，LDH的活力呈现先上升后下降的变化规律，但不同pH值水平之间HK 和LDH的活力变化均无统计学意义。

实验用水为天然江水，在20℃温度下，盐度对钉螺HK和LDH活力的影响均有统计学意义，在0.3～1.8盐度范围内，钉螺HK和LDH活力整体均呈下降趋势。

上述技术方案中的一个技术方案具有如下优点或有益效果，通过模拟自然环境，采用ELISA法测定钉螺在不同环境因子作用下HK和LDK活力的变化，探究钉螺呼吸代谢随环境因子变化的生物学依据，从而更好地防治钉螺。

附图说明

图1为本发明实施例中提供的环境因子对钉螺酶活力影响的实验方法的HK 标准曲线；