[发明专利]一种人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒，所述检测试剂盒包括SNP位点的两对上下游扩增引物及扩增模板提取试剂、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，第一轮扩增产物长于第二轮扩增产物且包含第二轮扩增产物，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板进行，其中第一轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：1～2所示，第二轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：3～4所示。本发明采用采用两轮扩增的方法对同一段片段进行重复扩增，高效准确地扩增待扩增片段并进行焦磷酸测序检测p53基因的SNP位点，可以快速的给出结论，便于临床对乳腺原位癌的疗效预判，取样方便并且检测高效快速成本低，为患者减轻了经济及身体上的负担。

技术领域

本发明涉及一种人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒，属于检测试剂盒领域。

背景技术

HPV是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒，包含约8000个碱基对。其中含8个开放读码框架(ORF)，分为3个基因区，包括早期编码区(E)、晚期编码区化(L)和上游调控区(URR)。编码区分别编码E蛋白和L蛋白。E蛋白E1、E2、E4、 E5、E6、E7和E8)主要参与病毒DNA复制、转录和细胞转化，L蛋白(L1和L2)为衣壳蛋白，主要参与病毒颗粒的组装和DNA包装。在早期开放读码框架中，E6和E7基因对细胞生长刺激最为重要，E6、E7编码的E6、E7蛋白引起宫颈上皮细胞永生化。而晚期读码框L1和 L2基因分别编码HPV的主要和次要衣壳蛋白，组装成HPV的衣壳。目前已发现150多种HPV 型别，与生殖道感染有关的有40多种。根据其致癌性可分为“高危”型和“低危”型，前者感染可导致生殖器官癌症的发生，其中宫颈癌HPV16型和HPV18型感染最为常见。在世界范围内，每年有近50万子宫颈癌新发病例，其中，约50％的子宫颈窟病例可归咎于裔危型HPV16感染引起。HPV16与宫颈癌的发生密切相关，其编码的E6蛋白与p53蛋白结合并降解p53蛋白，使p53丧失细胞周期调控、诱导凋亡和DNA修复的功能，这是宫颈癌发生的主要机制。由于HPV病毒与p53基因的密切关系，通过检测p53基因第4外显子72密码子 (rs1042522)，可以为宫颈癌的治疗选择及预后评估提供一定的遗传学依据。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒的技术方案如下：

所述检测试剂盒包括SNP位点的两对上下游扩增引物及扩增模板提取试剂、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，第一轮扩增产物长于第二轮扩增产物且包含第二轮扩增产物，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板进行，其中第一轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：1～2所示，第二轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：3～4所示。

本发明中由于待测序列的特殊性，设计了两轮反向引物序列相同的扩增试剂盒，该试剂盒特异性高且扩增结果准确，使用简单方便，为后续的测序工作奠定了良好的基础。

上述检测方法中提供的引物序列仅为基础的引物序列，检测过程中可以根据最后检测手段的不同对引物序列进行修饰，如在引物中加入荧光标记、生物素标记、纳米微球、磁珠等，修饰方法可采用本领域常规方法，上述各类型修饰应认为落入本发明的保护范围之内。

本发明中的检测样本可以选自血样或口腔拭子，基因筛查无痛无副作用，可以快速准确地为乳腺原位癌的临床用药提供遗传方面的依据，便于临床用药及预后跟踪。

扩增产物的检测方法可以参考现有的各类检测方法，在此不做限制。

优选的，所述检测方法中第一轮和第二轮扩增体系相比，第二轮PCR扩增体系的体积为第一轮PCR扩增体系体积的至少2倍，引物浓度等比例改变，但模板加入量相同。上述扩增体系可以保证第二轮PCR扩增的彻底进行。