[发明专利]一种丙型肝炎病毒检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种丙型肝炎病毒检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括两对扩增引物、多重PCR混合反应液，其中扩增引物用于扩增肥胖基因多态性位点，包括rs8099917位点和rs12979860位点，每对引物分别对应一个SNP位点的上下游区域。本发明采用丙型肝炎病毒检测试剂盒采用多重PCR的扩增方法，同时扩增IL‑28B的两个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。这种检测试剂盒可以扩展延伸到其他的SNP位点检测中，具有良好的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种丙型肝炎病毒检测试剂盒，属于检测试剂盒领域。

背景技术

丙型病毒性肝炎(hepatitis C virus，HCV)是慢性肝炎的重要类型，是目前全世界流行最为广泛的传染病之一，其引发的慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C，CHC)发病隐匿，易被患者忽视，是导致肝硬化、肝癌及肝功能衰竭的主要原因之一。国际上治疗CHC的标准方案为聚乙二醇干扰素α(Peg-IFNα)联合利巴韦林(RBV)，近年来有研究证明，CHC抗病毒治疗的临床疗效除了受病毒载量、年龄、种族、肝脏形态因素影响外，还与位于人体染色体19的编码干扰素λ3的白细胞介素-28B(IL-28B)单核苷酸多态性高度相关，但多数报道多集中于IL-28B rs8099917位点，且IL-28B对丙肝治疗疗效及预后的预测价值尚处于初步研究阶段。

但除IL-28B rs8099917位点外，IL-28B rs12979860位点据报道也与乙肝病毒的易感性相关。由于丙型肝炎流行广泛，因此针对丙型肝炎及其预后的快速检测试剂盒的研发对于临床有重要的意义。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种丙型肝炎病毒检测试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用的丙型肝炎病毒检测试剂盒的技术方案如下：

所述试剂盒包括两对扩增引物、多重PCR混合反应液，其中扩增引物用于扩增肥胖基因多态性位点，包括rs8099917位点和rs12979860位点，每对引物分别对应一个SNP位点的上下游区域。

优选的，所述rs8099917位点的扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：1～2所示。

优选的，所述rs12979860位点的扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：3～4所示。

优选的，所述多重PCR混合反应液包括DNA聚合酶、Mg²⁺和dNTPs。更进一步优选的，多重PCR混合反应液中还包括PCR稳定剂和增强剂。

优选的，所述扩增体系中，每个SNP位点的扩增引物和模板的加入量相同。

本发明中的检测试剂盒一般采用处理过的DNA样品作为扩增模板，样品一般来源于人全血或组织，处理样品可以减少血液中的免疫球蛋白G、血红蛋白和乳铁蛋白对PCR反应体系的干扰。

优选的，所述检测试剂盒还包括全血样品PCR缓冲液，所述缓冲液含有100mmol/LTris-HCl，50mmol/L KCl，pH 9.3～9.5。全血样品PCR缓冲液是本发明的一种优选的实施方案，其他类型的全血PCR试剂均可以采用，不限于本发明中的缓冲液和缓冲液配方。

优选的，试剂盒扩增体系为50μL的PCR体系，体系中同时含有rs8099917位点和rs12979860位点的扩增引物。

所述扩增体系具体为：

2×Platinum Multiplex PCR Master Mix 25μL；

模板2μL；