[发明专利]一种固定化谷氨酰胺转氨酶的制备方法

权利要求书

1.一种固定化谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，所述方法为，利用固定化和浸入保护剂复合方法制备得到所述固定化谷氨酰胺转氨酶，包括如下步骤：

1)将含有葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、卡拉胶、明胶的天然高分子化合物中的一种或多种制备成载体悬浮液，加热融化灭菌；

2)将灭好菌的所述载体悬浮液冷却至室温，加入pH调节剂调节pH后，与游离态谷氨酰胺转氨酶混合均匀，于2-8℃的条件下静置；

3)然后加入戊二醛溶液，固定化交联，然后去离子水洗涤，得到固定化体系；所述交联的时间为10-60min；

4)将所述步骤3)得到的固定化体系浸入保护剂中，制备得到所述固定化谷氨酰胺转氨酶；所述保护剂为包含13.3％蔗糖，13.3％葡萄糖中的任意一种或两种的糖类、13.3％山梨糖醇，33.3％丙三醇中的任意一种或两种的醇类、以及0.1％，0.2％，0.4％亚硫酸钠，0.2％，0.4％还原型谷胱甘肽，0.2％L-半胱氨酸及盐中的任意一种或多种的抗氧化剂的液态混合物；

所制备得到的固定化谷氨酰胺转氨酶的终浓度为100-200U/mL。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述pH调节剂为硫酸、乳酸、氢氧化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、盐酸、Tris、柠檬酸、柠檬酸三钠、纯水中的任意一种或多种；所述pH值为5.0-7.0。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述游离态谷氨酰胺转氨酶的初始浓度为500-1000U/mL；所述静置的时间为10-60min。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述洗涤的次数为2-5次；所述戊二醛溶液的浓度m/V为0.05-2.00％。

5.如权利要求1-4之任一项所述方法制备得到的固定化谷氨酰胺转氨酶，其特征在于，所述固定化谷氨酰胺转氨酶于50℃的环境下保存3天后酶活剩余率不低于90％，或于40℃的环境中保存2周后酶活剩余率不低于90％，或于室温25℃的环境中保存6个月后酶活剩余率不低于92％，或于室温25℃的环境中保存8个月后酶活剩余率不低于90％。

6.如权利要求5所述的固定化谷氨酰胺转氨酶，其特征在于，所述固定化谷氨酰胺转氨酶的理化特性如下：pH＝5.00-7.00，水分活度＝0.7-1.0，电导率＝0-3mS/cm，氧化还原电位＝0-500mV。