[发明专利]一种采用槟榔提取物与机械摩擦建立口腔粘膜纤维性变动物模型的建立方法

权利要求书

1.一种采用槟榔提取物与机械摩擦建立口腔粘膜纤维性变动物模型的建立方法，其特征在于：采用乙醇回流萃取法制备槟榔提取物，选取正常健康的SD大鼠作为模型动物，对照组：不作任何处理，正常饮水、饮食；槟榔提取液涂抹组：每日用消毒棉签蘸取槟榔提取液均匀涂抹大鼠上、下颚；机械刺激组：采用自制毛刷蘸取灭菌蒸馏水摩擦刺激大鼠上下颚；槟榔提取液涂抹+机械刺激组：每日用消毒棉签蘸取槟榔提取液均匀涂抹大鼠上、下颚，涂抹后放回笼中，禁水禁食1小时，同时隔日使用灭菌后的止血钳牵拉打开大鼠口腔，采用自制毛刷蘸取灭菌蒸馏水摩擦刺激大鼠上下颚不少于1min；造模时长共10周，造模结束后，大鼠不作任何处理，自由饮食饲养恢复2周，总时长合计12周，造模结束后取口腔黏膜组织进行HE染色、Masson染色、免疫组化指标，槟榔提取物采用乙醇回流萃取法制备，取市售槟榔原料粉碎后过筛，加适量乙醇溶液超声，随后进行乙醇回流萃取后过滤，乙醇提取物进一步浓缩挥干，得槟榔提取物，采用高效液相色谱法测定槟榔提取物中有效成分槟榔碱、槟榔次碱、去甲基槟榔次碱的含量。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：选取正常健康体重为200-300g的SD大鼠作为模型动物。

3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：槟榔提取物涂抹法：用消毒棉签蘸取槟榔提取液均匀涂抹大鼠上、下颚，涂抹后放回笼中，禁水禁食1小时。

4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：机械刺激法：使用灭菌后的止血钳牵拉打开大鼠口腔，采用自制毛刷蘸取灭菌蒸馏水摩擦刺激大鼠上下颚不少于1min，随后放回笼中，正常饲养、饮食。

5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：造模恢复期：造模结束后，大鼠不作任何处理，自由饮食饲养恢复2周，建立模型期间，每日观察动物情况，造模6、8、10、12周称取体重、采集口腔黏膜标本。

6.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于： 口腔黏膜病理切片，检测指标包括HE染色、Masson染色、免疫组化αSMA，并进行病理评分。

7.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：口腔黏膜纤维化病理评分：0分：上皮下固有层胶原纤维稀疏菲薄，无炎症细胞浸润，粘膜下层极不明显，固有层为致密结缔组织，粘膜下疏松结缔组织内含有丰富血管、腺体、淋巴管；1分：上皮下固有层胶原纤维增厚，粘膜下层少许炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层清楚但细胞排列整齐；2分：上皮下固有层胶原纤维增厚，粘膜下层炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层清楚但细胞排列整齐，基底层细胞扩张、排列紊乱，血管壁增粗，充血伴水肿；3分：上皮下固有层胶原纤维细胞增生明显，粘膜下层炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层细胞扩张增加、排列紊乱，血管壁增粗，充血伴水肿；4分：上皮下固有层胶原纤维细胞增生明显，粘膜下层大量炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层细胞扩张增加、排列紊乱，血管壁增粗至消失，充血伴水肿。

8.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：口腔黏膜胶原沉积病理评分：0分：上皮下固有层胶原纤维稀疏菲薄，无炎症细胞浸润，粘膜下层极不明显，固有层为致密结缔组织，粘膜下疏松结缔组织内含有丰富血管、腺体、淋巴管；1分：上皮下固有层胶原纤维增厚，粘膜下层少许炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层清楚但细胞排列整齐；2分：上皮下固有层胶原纤维增厚，粘膜下层炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层清楚但细胞排列整齐，基底层细胞扩张、排列紊乱，血管壁增粗，充血伴水肿，3分：上皮下固有层胶原纤维细胞增生明显，粘膜下层炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层细胞扩张增加、排列紊乱，血管壁增粗，充血伴水肿；4分：上皮下固有层胶原纤维细胞增生明显，粘膜下层大量炎症细胞浸润，纤维组织增生，基底层细胞扩张增加、排列紊乱，血管壁增粗至消失，充血伴水肿。