[发明专利]一种液基薄层细胞制片的方法

说明书

本发明公开了一种液基薄层细胞制片的方法；所述方法包括：将预处理后的样本逐个放入板条，并将板条逐个上机；转移样本至转样杯；对转样杯中的样本进行样本处理；处理后的样本加样至沉降仓，静置沉降，吸去上清；巴氏染色；将巴氏染色后的玻片转移出沉降仓，液体封片。本发明优化了制片的步骤，增加了样本处理的过程，冲洗红细胞去除，换缓冲液加PBS，磁珠去除大部分白细胞干扰等步骤，大大提高了制片的质量。

技术领域

本发明涉及一种液基薄层细胞制片的方法。

背景技术

妇女发展纲要(2011-2020)宫颈癌筛查覆盖率需达到80％，基于我国女性人口总数约6.5亿，30％从来没有进行过筛查的事实基础，目前筛查率远低于这一水平。主要是因为手工操作多，敏感性差，特异性差等问题。

液基薄层细胞检测工作原理为通过采集阴道或宫颈分泌物，获得脱落细胞后浸入液基细胞处理试剂中进行处理，试剂中的裂解成分能对红细胞进行裂解，去除红细胞对检验结果造成的干扰；同时试剂中的固定成分能保存固定白细胞、脱落上皮细胞等有价值的细胞；并使包裹在黏液中的有效细胞充分分离出来，防止有价值细胞的丢失。将有效细胞制备成细胞悬液，最后通过过滤离心方法清除黏液对制片的干扰，制成脱落细胞薄片。可用HE染色、巴氏染色或其他免疫组织化学染色等方法使细胞着色，再通过人工观察分析来检查阴道或宫颈的细胞形态，诊断子宫颈癌及其癌的前期变化、人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒感染。其中，液基细胞制片是后续染色及诊断的基础保障，只有合格的涂片才能正确反映病理状态，帮助医生做出正确诊断。

通过对现有专利文献的检索发现，申请号201110056356.3的中国发明专利申请公开了一种自动制作液基细胞的制片方法；其通过分离细胞、过滤沉降、提取细胞液、离心制片步骤，可在一台设备上进行自动制片，其自动化程度高，省时、省工、快速、高效。制片数量灵活，可一次制作多个玻片，适用范围广，自动精确地确定细胞提取量，细胞层薄，一致性好，背景干净，保证了玻片上的细胞转移数量均匀和一致性。然而，该方法并没有对样本进行处理，这时样本中依然有很多的白细胞和红细胞，影响观察。并且这里制片结束，没有实现染色和封片，没有真正实现整个流程的自动化。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供一种液基薄层细胞制片的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种液基薄层细胞制片的方法，所述方法包括如下步骤：

S1、将预处理后的样本逐个放入板条，并将板条逐个上机；

S2、转移样本至转样杯；对转样杯中的样本进行样本处理；

S3、处理后的样本加样至沉降仓，静置沉降，吸去上清；

S4、巴氏染色；

S5、将巴氏染色后的玻片转移出沉降仓，液体封片。

优选的，步骤S1中，所述预处理包括样本整理、摆放、扫码。

优选的，步骤S2中，所述样本处理包括37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰。

目前现有技术中，液基薄层细胞制片时通常做法是不做任何处理，这样就造成了样本中原本存在的红细胞和白细胞会干扰制片质量或者增加操作难度。

优选的，所述37℃孵育的时间为8-12min。

优选的，所述反应体系切换为生理盐水体系。

优选的，所述冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水；冲洗时间为3-5min。

优选的，步骤S4中，所述巴氏染色包括如下步骤：

A1、步骤S3中样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇8-12秒；