[发明专利]一种二硫化钼/银纳米免疫基底材料的制备方法及其可重复免疫检测应用

权利要求书

1.一种非治疗和/或诊断目的的二硫化钼/银纳米免疫基底材料的可重复免疫检测应用，其特征在于（1）二硫化钼/银纳米免疫基底材料的制备包括以下步骤：

A.二硫化钼纳米材料的制备

将钼酸钠二水合物、硫代乙酰胺和硅钨酸水合物按0.3629-1.0887克：0.33809-1.01427克：4.0294-12.0882克的比例加入到25-75毫升去离子水中，搅拌15-25分钟使其混合均匀后，逐滴加入氢氧化钠水溶液调节溶液pH值为7.62后，将反应溶液转移至水热反应釜中密封，置于200-240℃下反应22-26小时，待反应釜自然冷却至室温后，过滤得到固体产物，将固体产物依次采用氢氧化钠水溶液、无水乙醇和去离子水洗涤，共重复洗涤1-3次，再将固体产物置于45-55℃下真空干燥10-14小时得到二硫化钼纳米材料；

B.二硫化钼/银纳米材料的制备

将步骤（1）得到的二硫化钼纳米材料粉末溶于去离子水中，超声1-3分钟使其混合均匀，得到浓度为30毫克/毫升的二硫化钼纳米材料溶液，将二硫化钼纳米材料溶液旋涂在干净硅片上，将其置于45-55℃下真空干燥10-14小时后，采用磁控溅射的方法于硅片表面溅射一层银纳米颗粒，即得到二硫化钼/银纳米材料；

C.二硫化钼/银纳米免疫基底材料的制备

将0.2毫升含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的PBS混合溶液滴加到1毫克步骤（2）得到的二硫化钼/银纳米材料上后，置于37℃孵育1小时，再用PBS溶液反复冲洗3次；然后滴加20-60微升含癌症标志物抗体的PBS缓冲溶液于2-6℃下孵育10-14小时，再依次用TBS溶液、PBS溶液和去离子水清洗去除多余未反应的抗体后，再滴加10-60微升含牛血清白蛋白的PBS缓冲溶液于室温下反应1小时，清洗去除多余未反应的牛血清白蛋白后，即得到二硫化钼/银纳米免疫基底材料，并置于4℃下储存待用，其中所述的含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的PBS混合溶液中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度为2毫克每毫升，N-羟基琥珀酰亚胺的浓度为1毫克每毫升；所述的含癌症标志物抗体的PBS缓冲溶液中癌症标志物抗体浓度为2毫克/毫升，所述的含牛血清白蛋白的PBS缓冲溶液中牛血清白蛋白的质量百分比为3%；

（2）可重复免疫检测应用包括以下步骤：

A.癌症标志物的免疫检测

将20微升含待测癌症标志物抗原的缓冲溶液滴加到步骤（1）制得的二硫化钼/银纳米免疫基底材料上，然后置于37℃下孵育2小时，清洗去除多余未反应的待测抗原后，向吸附有待测抗原的二硫化钼/银纳米免疫基底上滴加15微升金纳米棒免疫探针溶液，于37℃下孵育2小时，清洗去除多余未反应的金纳米棒免疫探针，利用拉曼光谱仪对免疫反应后得到的金纳米棒免疫探针和二硫化钼/银纳米免疫基底的复合物进行光谱检测，根据癌症标志物抗原浓度与拉曼特征峰强度之间的线性关系，计算得到待测癌症标志物抗原的浓度；

B.二硫化钼/银纳米材料的回收方法

光谱检测结束后，采用紫外灯照射样品2小时，光催化去除二硫化钼/银纳米免疫基底上的待测抗原和抗体，用磷酸盐缓冲溶液冲洗二硫化钼/银纳米免疫基底，洗去残留的金纳米棒免疫探针，将清洗干净的二硫化钼/银纳米材料再次与癌症标志物抗体结合形成新的二硫化钼/银纳米免疫基底，重复免疫反应、检测及催化降解过程，即可实现对癌症标志物的可重复免疫检测。

2.根据权利要求1所述的一种非治疗和/或诊断目的的二硫化钼/银纳米免疫基底材料的可重复免疫检测应用，其特征在于：步骤（1）A中所述的氢氧化钠水溶液的浓度为1毫摩尔每毫升。

3.根据权利要求1所述的一种非治疗和/或诊断目的的二硫化钼/银纳米免疫基底材料的可重复免疫检测应用，其特征在于：步骤（1）B中采用的磁控溅射方法，溅射条件为真空度0.3帕，功率50瓦，溅射时间60-140秒。