[发明专利]一种用于肿瘤术后放疗光热-光动力联合治疗的控释水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种用于肿瘤术后放疗光热-光动力联合治疗的控释水凝胶的制备方法，其特征在于：以μg、mg、g、μL和mL计，包括以下步骤：

1)取0.8-1.2g蚕丝，用0.4-0.6wt％的Na₂CO₃溶液在浴比1∶90-110下于90-100℃水浴中对蚕丝进行至少一次脱胶处理，每次30-40min；

2)配制400-600mL 9.3M的溴化锂溶液，在浴比1∶40-60下于55-65℃水浴中对蚕丝进行溶解，时间为3-4h；

3)将步骤2)所得溶液于去离子水中透析2-3d；

4)将步骤3)所得溶液于PBS溶液中继续透析1-2d；

5)将步骤4)所得溶液进行浓缩，得到4-8wt％的丝素蛋白溶液；

6)取0.40.6g黑色素溶于8-12mL去离子水中得到黑色素水溶液，再取1-1.5g CuCl₂·2H₂O和300-350mg聚乙烯吡咯烷酮溶于100-150mL去离子水中，然后合并两种溶液，搅拌2-3h，加入150-200mg Na₂S·9H₂O；然后置于水浴中加热至85-90℃，搅拌15-20min，得到深绿色硫化铜纳米悬浮液；然后在去离子水中透析3-4d，离心取沉淀，55-65℃真空干燥过夜，得到硫化铜@黑色素纳米粒；

7)取0.5-0.8g步骤6)所得硫化铜@黑色素粒子分散于0.5-0.8mL水溶液中，超声25-35min分散均匀，将其滴加至18-22mg/mL PEG5000-NH₂水溶液中，剧烈搅拌10-14h，用去离子水洗涤多次，除去未反应的PEG5000-NH₂，冻干法除去水，得到硫化铜@黑色素-PEG纳米粒子；

8)取0.4-0.6g步骤7)所得硫化铜@黑色素-PEG纳米粒子分散于100-120mL Tirs缓冲液中，加入0.4-0.6g多巴胺，于室温搅拌12-14h，用去离子水洗涤多次，冻干法除去水，得到硫化铜@黑色素-PEG@聚多巴胺纳米粒子；

9)取0.8-1.2mg 5-氨基乙酰丙酸溶于0.8-1.2mL PBS缓冲液中；

10)取0.6-1.0mL步骤5)所得丝素蛋白溶液，再取100-200μg步骤8)所得硫化铜@黑色素-PEG@聚多巴胺纳米粒和100-200μL步骤9)所得5-氨基乙酰丙酸溶液加入到丝素蛋白溶液，于35-39℃下搅拌2-3h，加入10-20μL 1000U/mL的辣根过氧化物酶水溶液，混合均匀后加入10-20μL 0.4-0.6％的过氧化氢溶液，混合均匀后用移液枪转移至PTFE模具中，于35-39℃环境下放置3-4h成型；

11)将步骤10)中成型后的负载有5-氨基乙酰丙酸和硫化铜@黑色素-PEG@聚多巴胺纳米粒子的丝素蛋白水凝胶脱模，得到用于肿瘤术后放疗光热-光动力联合治疗的控释水凝胶。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中，每次脱胶完后用去离子水冲洗多次以除去残余的杂质。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤3)中，透析过程为：在1-5℃下，将溶液置于8000Da透析袋中在去离子水中透析2-3d。

4.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)中，透析过程为：在1-5℃下，将溶液置于8000Da透析袋中在PBS溶液中透析2-3d。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5)中，浓缩过程为：在1-5℃下，将溶液置于8000Da透析袋中在18-22wt％的聚乙二醇中进行浓缩。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤6)中，所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量为24000。

7.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤6)中，将黑色素水溶液于超声作用下，在30min内缓慢地滴加到CuCl₂·2H₂O和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液中。