[发明专利]双靶点识别可调控工程化免疫细胞的制备方法

说明书

本发明公开了一种双靶点特异性识别肿瘤细胞不同抗原的可调控基因工程化免疫细胞的制备方法。为解决CAR‑T治疗中的有效性及安全性问题，发明人将肿瘤表面特异性抗原识别分子部分和CAR‑免疫细胞及活化结构域分开构建，在肿瘤靶向治疗中采用标签分子修饰肿瘤抗原识别蛋白作为一种新型的双靶点识别分子，通过在免疫细胞上构建标签特异性的CAR，制备新型的双靶点识别可调控基因工程化免疫细胞，从而实现对肿瘤相关抗原多靶点稳定识别的同时，提高其安全性和有效性，力求克服CAR‑T细胞临床治疗中潜在的毒副作用和治疗耐受性。

技术领域

本发明涉及采用双靶点识别分子提高嵌合抗原受体(CAR)-免疫细胞用于提高肿瘤治疗的安全性和有效性。

背景技术

癌症治疗一直是临床医疗领域尚未攻克的难题之一，随着现代医学的发展，癌症的免疫治疗逐渐取得了一定的突破，并成为癌症治疗领域的焦点。2011年12月一篇名为《Cancer immunotherapy comes of age》的评论文章同时刊登在Nature和临床肿瘤最顶级杂志Journal of Clinical Oncology上，文章评论免疫疗法是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，该方法弥补了传统疗法的弊端，被认为是二十一世纪肿瘤综合治疗模式中最活跃、最有发展前途的一种治疗手段(1)。目前，免疫治疗手段包括抗体类药物、疫苗类药物、免疫检查点抑制剂、细胞因子以及过继性细胞疗法等，而过继性细胞治疗策略在对免疫细胞进行工程化改造后，无论在肿瘤治疗的靶向特异性和功能持久性等方面都得到了显著的提高，而2017年的两款嵌合抗原受体(CAR)-T细胞产品的获批，印证了工程化免疫细胞疗法也从治疗的一种前景概念发展成为现实的解决方案。

嵌合抗原受体修饰T细胞(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)治疗肿瘤的方法是近年来发展最快的一种肿瘤免疫新疗法。CAR的修饰可使T细胞在获得靶向杀伤能力的同时获得更强的增殖及抗凋亡的能力，其肿瘤杀伤作用的发挥也不会受到主要组织相容性复合体(MHC)的限制。1989年，Eshhar(2)及其团队第一次提出了“嵌合受体”的概念，他们将T细胞受体(TCR)的可变区用单链抗体(scFv)替代，与T细胞内信号传递结构域CD3ζ或是FcRγ进行组合，由此得到了具有抗原靶向性的T细胞，经改造后的T细胞不再具有MHC的限制性，上述嵌合受体的形式已经基本形成了第一代CAR-T细胞的雏形。目前，第一代CAR-T细胞技术已在淋巴瘤、鼻咽癌、卵巢癌及肾癌中进行了初步的临床试验，由于其在体内的存活时间并不理想，从而影响了最终的临床效果。为了保证CAR-T细胞能够完全活化，第二代及第三代CAR-T细胞引入了一个或两个共刺激信号的细胞内信号传递结构域(如CD28，4-1BB或者OX40)，从而赋予了CAR-T细胞更强的增殖及抗凋亡能力，其细胞因子的分泌水平及细胞毒性同时也有所增强。然而由于肿瘤的混合异质性和免疫抑制微环境的存在，CAR-T细胞无法对复杂实体肿瘤进行有效杀伤。为了能克服这一问题，新一代CAR-T细胞技术应运而生，这种被改造后的T细胞在原来第二代和第三代CAR-T细胞的基础型上，引入可以辅助靶向识别、促进原位炎症反应或者封闭免疫检测点信号等功能分子，从而起到协同并提高CAR-T细胞的肿瘤靶向性和抗肿瘤杀伤活性(3)。

CAR-T细胞疗法的出现改变了手术、放疗、化疗、靶向疗法以及激素疗法等传统肿瘤治疗的理念，其可靶向抗原的广谱性和多样性，以及在体内代谢增值的可持续性等特点，为肿瘤的治疗提供了更多更有效的选择。但是作为一种“活的”药物，CAR-T与其他治疗方法有很大区别，其潜在安全性问题不容忽视，比较常见的包括靶向毒性、脱靶效应、细胞因子释放综合征等(4)。