[发明专利]一种干燥细胞模型及其建立方法以及应用有效
申请号: | 201910620214.1 | 申请日: | 2019-07-10 |
公开(公告)号: | CN110272863B | 公开(公告)日: | 2021-07-02 |
发明(设计)人: | 毛华;张晓鸥;谢文娟;王玉玲;陈雯雯;范馨仪;石艳丽;郭学平 | 申请(专利权)人: | 华熙生物科技股份有限公司;山东华熙海御生物医药有限公司 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071 |
代理公司: | 北京彩和律师事务所 11688 | 代理人: | 刘磊;闫桑田 |
地址: | 250000 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 干燥 细胞 模型 及其 建立 方法 以及 应用 | ||
1.一种干燥细胞模型建立方法,所述方法包括以下步骤:
细胞培养步骤,于细胞培养板上在控温、控湿条件下对细胞进行培养;
细胞干燥步骤,吸干经细胞培养步骤后的细胞培养液,然后在风速小于0.1m/s、相对湿度在10.0%以下,温度在25℃±5℃的条件下暴露细胞;
再培养步骤,在控温、控湿条件下对细胞进行再培养,使经干燥处理的细胞活力降至45%-70%,其中,经干燥处理的细胞活力是指由WST-1方法测得,将在给定条件下进行孵育后的未经干燥处理组的吸光度值定义为细胞活力为100%,在给定条件下对经干燥处理组进行同样的孵育后,测定其吸光度值,得到经干燥处理组的吸光度值/未经干燥处理组的吸光度值的检测结果,并以百分比表示的所述检测结果;
其中,用于构建所述干燥细胞模型的细胞是人皮肤细胞,所述人皮肤细胞是人皮肤成纤维细胞。
2.根据权利要求1所述的干燥细胞模型建立方法,其中,使用复苏后第3~4代的人皮肤成纤维细胞。
3.根据权利要求1或2所述的干燥细胞模型建立方法,其中,
在细胞培养步骤中,当贴壁培养的人皮肤细胞在细胞培养皿中达到80%以上融合时,对该处理后的细胞进行消化、然后混匀计数之后,加入细胞培养板,对细胞进行培养。
4.根据权利要求3所述的干燥细胞模型建立方法,其中,所述在细胞培养板上的细胞培养是在37℃、饱和湿度下、CO2浓度为5%的细胞培养箱内培养24-48小时。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的干燥细胞模型建立方法,其中,
在细胞干燥步骤中,所述干燥步骤在超净工作台内完成;吸干经细胞培养步骤后的细胞培养液;将用于培养细胞的细胞培养板向下倾斜30-60度角,吸净孔内培养液,然后将上述吸干培养液之后的细胞放入干燥器内进行干燥。
6.根据权利要求5所述的干燥细胞模型建立方法,其中,
在所述干燥器内在20-30℃的温度、干燥10-60分钟来完成干燥步骤。
7.根据权利要求1~4中任一项所述的干燥细胞模型建立方法,其中,
在再培养步骤中,所述培养在控温、控湿条件下进行。
8.根据权利要求7所述的干燥细胞模型建立方法,其中,所述再培养是在37℃、饱和湿度下、CO2浓度为5%的细胞培养箱内培养16-24小时,采用无血清培养体系。
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