[发明专利]一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记及其应用在审
申请号: | 201910619829.2 | 申请日: | 2019-07-10 |
公开(公告)号: | CN110218801A | 公开(公告)日: | 2019-09-10 |
发明(设计)人: | 杨创业;邓岳文;李俊辉;杨晶淼;郑哲;王庆恒;陈伟耀 | 申请(专利权)人: | 广东海洋大学 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12N15/11 |
代理公司: | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人: | 李慧 |
地址: | 524000 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 马氏珠母贝 生长性状 位点 分子标记辅助育种 分子标记 微管蛋白 遗传进展 育种周期 碱基 壳高 壳宽 壳重 生产成本 应用 关联 | ||
1.一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记,其特征在于:所述的SNP分子标记位于马氏珠母贝微管蛋白EGFR基因的C21636T位点,此处碱基为C或T。
2.一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记的应用,其特征在于:权利要求1所述的SNP分子标记应用于马氏珠母贝早期选育。
3.根据权利要求2所述的一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记的应用,其特征在于:SNP分子标记位点的基因型对马氏珠母贝壳型性状进行早期选育。
4.根据权利要求3所述一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记的应用,其特征在于:包括如下步骤:
(1)提取待测马氏珠母贝的基因组DNA;
(2)设计特异性扩增含有马氏珠母贝EGFR基因21636位点的基因片段的引物对;
(3)以步骤(2)设计的引物对马氏珠母贝基因组DNA进行PCR扩增,检测扩增所得基因片段的SNP位点的基因型;
(4)基于SNP位点的基因型对马氏珠母贝壳型性状进行早期选育。
5.根据权利要求4所述一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记的应用,其特征在于:所述PCR扩增的引物对的序列如SEQ ID。
6.根据权利要求4所述一种与马氏珠母贝生长性状相关的EGFR基因SNP分子标记的应用,其特征在于:步骤(1)所述的提取待测马氏珠母贝的基因组DNA的步骤如下:使用试剂盒提取基因组DNA,具体步骤包括:
(1)取0.05g闭壳肌,放入装有200μL缓冲液的高压灭菌过的1.5mL离心管;
(2)剪碎肌肉组织,加入4μL 100mg/mL核糖核酸酶A溶液,振荡15sec,室温放置5min;
(3)加入20μL20mg/mL蛋白酶K溶液,涡旋混匀,简短离心,56℃放置3h,每小时振荡混合样品2-3次,每次振荡混匀15sec;
(4)加入200μL缓冲液,充分颠倒混匀,70℃放置10min,简短离心;
(5)加人200μL无水乙醇,充分颠倒混匀,简短离心;
(6)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中,12,000rpm离心30sec,倒掉废液,将吸附柱放回收集管中;
(7)向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液,12,000rpm离心30sec,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中;
(8)向吸附柱中加入600μL漂洗液,12,000rpm离心30sec,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中;
(9)重复操作步骤7;
(10)将吸附柱放回收集管中,12,000rpm离心2min,倒掉废液,将吸附柱置于室温放置10分钟;
(11)将吸附柱转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液,室温放置5min,12,000rpm离心2min,将溶液收集到离心管中。
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