[发明专利]一种利用紫茎泽兰培养北方根结线虫的方法

权利要求书

1.一种利用紫茎泽兰培养北方根结线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)采集或采购北方根结线虫冷藏备用；

(2)准备紫茎泽兰的培养材料：选取生长时间不大于2月，株高度不大于1.0米，根系长度在10cm以上的紫茎泽兰健康植株，用水洗净，放置在通风处待表面水干后，将植株的上部和主芽去除，去除的上部占植株总长度的25～35％，获得紫茎泽兰的培养材料，备用；

(3)准备种植基质：取适宜紫茎泽兰种植的土壤，在80～120℃下干燥1.5～2.5小时，以杀灭土壤内可能含有的其它线虫及虫卵，将恢复至室温后的土壤均匀铺设在透气良好的容器底，土壤厚度为1.5cm-2.0cm，备用；取直径2-8mm的蛭石颗粒灭菌后备用；

(4)接种：将步骤(2)备用的紫茎泽兰培养材料平铺于无菌中性滤纸上，滤纸用蒸馏水湿润，向培养材料上均匀喷洒pH6.5-8.0的磷酸缓冲液，将步骤(1)备用的北方根结线虫恢复至室温，镜检虫体活性后,接种至培养材料直径大于1.0mm的根须上，根须每2.0cm长度接种10-20头虫体，接种后将湿润的脱脂棉覆盖在培养材料的表面，转移至温度25℃-30℃，相对湿度50％～70％的人工气候箱中于无光照条件下静止4h～6h，取出后将培养材料铺设在步骤（ 3） 备用的土壤表面，填入步骤（ 3） 备用的蛭石，将培养材料全部埋入蛭石内，在25-32℃，正常日照下种植，期间每3～4天浇水一次以保持紫茎泽兰叶片不萎蔫，控制植株高度在1.2～1.5m，每8～12天进行一次抹芽处置以促进根部发育，培养28～45天出现根结，取根结分离后即可获得北方根结线虫活体，保留植株少量根结重新种植可持续获取北方根结线虫。

2.如权利要求1所述的利用紫茎泽兰培养北方根结线虫的方法，其特征在于按以下方法自行采集北方根结线虫：挖取处于采收末期的茄科作物的植株完整根系，取根系上的根结，水洗后用蒸馏水于室温下浸泡10～18小时，收集带沉淀物的浸泡液，2～6℃下保存待用，再将浸泡过的根结重复上述过程2～4次，抛弃根结，将几次收集的带沉淀物浸泡液合并，过15～20目分离筛，将过筛后所得物静置3～5小时，轻轻移弃上部占静置物总体积75～85％的液体后，将下部剩余物经1500～2500r/min离心1～3分钟，弃去上清液，向剩余物中加入浓度为480～500g/L的蔗糖水，所加蔗糖水的体积为该剩余物体积的3～5倍，混匀后经1500～2500r/min离心1～3分钟，上清液过700～900目分离筛，收集分离筛上的虫体，经镜检检定为北方根结线虫后3～5℃冷藏备用，冷藏时间不大于72小时。

3.如权利要求2所述的利用紫茎泽兰培养北方根结线虫的方法，其特征在于自行采集北方根结线虫时，所述茄科作物为番茄，蒸馏水为单蒸水，根结浸泡3次。

4.一种利用紫茎泽兰培养北方根结线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)准备紫茎泽兰的培养材料：选取生长时间不大于2月，株高度不大于1.0米，根系长度在10cm以上的紫茎泽兰健康植株，用水洗净，放置在通风处待表面水干后，将植株的上部和主芽去除，去除的上部占植株总长度的25～35％，获得紫茎泽兰的培养材料，备用；

(2)准备种植基质：取适宜紫茎泽兰种植的土壤，在80～120℃下干燥1.5～2.5小时，以杀灭土壤内可能含有的其它线虫及虫卵，将恢复至室温后的土壤均匀铺设在透气良好的容器底，土壤厚度为1.5cm-2.0cm，备用；取直径2-8mm的蛭石颗粒灭菌后备用；

(3)接种：将步骤(1)备用的紫茎泽兰培养材料平铺于无菌中性滤纸上，滤纸用蒸馏水湿润，将采购或自行收集的北方根结线虫卵囊，接种至培养材料直径大于1.0mm的根须上，根须每1.0cm长度接种10～20个卵囊，接种后将湿润的脱脂棉覆盖在培养材料的表面，转移至温度25℃-30℃，相对湿度50％～70％的人工气候箱中于无光照条件下静止12h～16h，取出后将培养材料铺设在步骤（ 2） 备用的土壤表面，填入步骤（2）备用的蛭石，将培养材料全部埋入蛭石内，在25-32℃，正常日照下种植，期间每3-4天浇水一次，以紫茎泽兰叶片不萎蔫即可，种植过程要控制植株高度在1.2-1.5m，每8～12天进行一次抹芽处置，以促进根部发育，培养35-45天出现根结，取根结分离后即可获得北方根结线虫活体，保留植株少量根结重新种植可持续获取北方根结线虫。