[发明专利]一种巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法及其应用

权利要求书

1.一种巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)获得N端巯基基团修饰的目标肽核酸探针；

2)获得dC12为模板合成的银纳米簇探针；

3)将所述目标肽核酸探针和银纳米簇探针混合得到第一混合溶液；将所述目标肽核酸探针与待测DNA片段进行杂交，然后与银纳米簇探针混合得到第二混合溶液；

4)在相同条件下测定荧光光谱，分别获取第一混合溶液的第一光谱信息和第二混合溶液的第二光谱信息；对比第一光谱信息和第二光谱信息，鉴别碱基错配；

所述目标肽核酸序列如SEQ ID NO.1所示，银纳米簇探针的模板DNA序列如SEQ IDNO.2所示，不含突变的待测DNA片段的基因序列如SEQ ID NO.3所示；

步骤4)中的比对中第二光谱信息和第一光谱信息吻合时，则说明待测目标DNA中不含SNPs，否则说明待测目标DNA中含有SNPs；

所述方法用于非疾病诊断目的。

2.根据权利要求1所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，

当待测DNA片段含碱基突变时，所述目标肽核酸探针与所述DNA片段形成弱稳定性双链；

当待测DNA片段不含碱基突变时，所述目标肽核酸探针与所述DNA片段形成强稳定性双链。

3.根据权利要求1所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述步骤1)包括：

通过固相多肽合成技术制备目标肽核酸寡聚体，并在所述目标肽核酸的末端进行巯基基团的修饰。

4.根据权利要求1所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述步骤2)中包括：

使dC12模板中的两个胞嘧啶碱基C与银溶液中的Ag⁺反应形成C-Ag⁺-C复合物，然后使所述复合物在强还原剂溶液中形成AgNCs。

5.根据权利要求4所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述银溶液为硝酸银溶液；

所述强还原剂为硼氢化钠。

6.根据权利要求1所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述目标肽核酸探针与待测DNA片段杂交时，所述目标肽核酸与待测DNA的摩尔比为1:1。

7.根据权利要求1所述所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述步骤3)中，

在第一混合溶液和第二混合液中，所述银纳米簇探针的浓度为1.5～2.5μM；

在第二混合溶液中，目标肽核酸探针与待测DNA片段杂交得到的双链浓度为0.05～1μM。

8.根据权利要求1所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述步骤4)中，所述第一光谱信息为荧光信号，所述第二光谱信息为荧光信号。

9.根据权利要求1所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述方法还包括，将所述目标肽核酸探针与不同浓度的完全互补配对的DNA片段标准品进行杂交，建立标准曲线来测试所述方法灵敏度的步骤。

10.根据权利要求9所述的巯基功能化肽核酸增强银纳米簇荧光信号检测单核酸多态性的方法，其特征在于，所述不同浓度的目标DNA浓度分别为：0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0μM，肽核酸探针浓度为1μM。