[发明专利]电化学检测细胞的方法及其组合物

说明书

一种检测细胞的组合物，以SEQ ID No 2～5所示四条寡DNA自组装形成的DNA组装体为模板合成银纳米簇，细胞表面经TCEP处理后，经迈克尔加成反应将5’端具有马来酰亚胺基团的寡DNA链连接到细胞表面，并通过碱基互补配对原则与含有银纳米簇的DNA组装体相结合。在电极上修饰的抗体用于捕获目标细胞，银纳米簇固定于目标细胞上，并通过在硝酸溶液中溶出金属银离子实现目标间充质干细胞的定量检测。本发明的检测组合物，采用DNA组装体模板化银纳米簇作为电化学信号，点击化学介导的信号放大体系，实现对样本中目标细胞进行定性和定量检测。

技术领域

本发明涉及一种生物传感检测方法，尤其涉及一种基于温和化学反应指导的普适性高灵敏检测细胞的电化学传感方法，以及实施该方法的组合物。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是在血管周围发现的纤维母细胞样细胞的异质群体，类似于周细胞，它们集中在骨髓和脂肪组织中并具有多种潜能，易于分离和培养，体外扩增潜能高，是一种极具吸引力的治疗工具。由于它们的分化潜能、向创面的趋向性，以及产生促进愈合、血管生成、生长和细胞募集以及抑制炎症的可溶性因子，它们具有修复病变或受损组织和再生原生组织的潜力。临床上对间充质干细胞的灵敏检测可以为骨损伤、软骨损伤,成骨不全症,肺损伤、肾病、糖尿病、神经系统疾病、自身免疫性疾病等疾病的临床诊断和治疗提供许多重要的信息。

金属纳米簇作为一种新型纳米材料具有尺寸小、比表面积大、稳定性高、生物相容性好等优点,已被广泛地应用于分析化学领域。近年来，以DNA为模板合成的银纳米簇由于良好的电化学信号响应和稳定的荧光信号，在生物传感检测领域也引起极大的兴趣。目前，DNA模板化的银纳米簇已经广泛应用于蛋白质、DNA、RNA等生物分子的检测。然而，由于灵敏度不足等原因，该方法在临床应用方面受到了限制。本发明基于马来酰亚胺能与巯基发生迈克尔加成反应的原理提出了以DNA组装体模板化银纳米簇为主要信号来源结合表面温和化学连接方法从而检测间充质干细胞的电化学新方法研究思路。本方法具有反应条件温和、操作简便以及普适性强的特点，可以根据间充质干细胞甚至其他不同种类细胞的特定检测需求而量身定制，满足不同检测的实际需求，具有良好的临床应用潜能。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种组合物，含有金属粒子，其在0.216V下具有电化学响应信号的特性，用于对细胞实施定性检测。

本发明的另一个目的在于提供一种组合物，含有金属粒子，其在0.216V下具有电化学响应信号的特性，且细胞浓度的对数值与在0.216V下的电流值具有呈良好的线性关系，用于对细胞实施定量检测。

本发明的再一个目的在于提供一种检测细胞的方法，实现对样本中目标细胞的定性检测。

本发明的又一个目的在于提供一种检测细胞的方法，实现对样本中目标细胞的定量检测。

本发明的目标细胞，系对样本中含有的拟检测的细胞总称，比如：体细胞、干细胞和癌细胞等。

一种组合物，包括：

寡核苷酸，其5’端具有马来酰亚胺基团；

金属银，其附着于DNA组装体，形成DNA组装体-Ag纳米簇；

抗体，其通过杯[4]芳烃偶联于金电极，用于与所述的目标细胞结合；

本发明的组合物，还包括硝酸，其作用于桥联DNA模板化AgNCs，溶出银离子。

本发明的DNA组装体为多聚DNA链，以此为模板形成DNA组装体-银纳米簇，制备银纳米簇。

本发明的组合物，寡核苷酸其序列如SEQ ID No 1所示。

本发明的组合物，由四条SEQ ID No 2～5所示的寡DNA序列自组装形成的DNA组装体。