[发明专利]电化学检测细胞的方法及其组合物有效
| 申请号： | 201910607519.9 | 申请日： | 2019-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN110361433B | 公开（公告）日： | 2021-09-24 |
| 发明（设计）人： | 章毅;赵婧;伍婷;曹亚 | 申请（专利权）人： | 章毅;中国干细胞集团上海生物科技有限公司;重庆市干细胞技术有限公司;中国干细胞集团海南博鳌附属干细胞医院有限公司;上海市干细胞技术有限公司;陕西省干细胞技术有限公司;苏州市干细胞技术有限公司;三亚市干细胞技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N27/327 | 分类号： | G01N27/327 |
| 代理公司： | 上海市海华永泰律师事务所 31302 | 代理人： | 包文超 |
| 地址： | 200051 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 电化学 检测 细胞 方法 及其 组合 | ||
1.一种检测细胞的方法，其特征在于包括：
抗体功能化的金电极与三(2-羧乙基)膦处理后的目标细胞悬液于37℃±0.5℃反应1~2小时使目标细胞连接到金电极上；
加入马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸溶液，于37℃±0.5℃反应0.5~1小时，使得马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸连接到细胞表面；
加入DNA组装体模板化的银纳米簇，于37℃±0.5℃反应0.5~1小时，使得银纳米簇与寡核苷酸连接，从而将银纳米簇固定在细胞表面；
然后加入稀硝酸以溶出银离子，于25℃±0.5℃反应2~3小时后，在-0.1V-0.5V的电势下，并在0.216V处显示金属银的电化学信号峰，实现目标细胞进行定性检测；
将活化的所述金电极置于100~150µL的1mM杯[4]芳烃水溶液中，在4℃条件下修饰8~10小时；4℃条件下与100~150µL的CD44抗体溶液偶联2~3小时得到所述的抗体功能化的金电极；
分别取2.5µL、100µM的SEQ ID No 2~5所示序列的溶液混匀后在95℃±0.5℃水浴条件下反应5min~10min，然后自然冷却得到所述的DNA组装体。
2.一种检测细胞的方法，其特征在于包括：
抗体功能化的金电极与三(2-羧乙基)膦处理后的目标细胞悬液于37℃±0.5℃反应1~2小时使目标细胞连接到金电极上；
加入马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸溶液，于37℃±0.5℃反应0.5~1小时，使得马来酰亚胺基团修饰的寡核苷酸连接到细胞表面；
加入DNA组装体模板化的银纳米簇，于37℃±0.5℃反应0.5~1小时，使得银纳米簇与寡核苷酸连接，从而将银纳米簇固定在细胞表面；
然后加入稀硝酸以溶出银离子，于25℃±0.5℃反应2~3小时后，在-0.1V-0.5V的电势下，并在0.216V处显示金属银的电化学信号峰，实现目标细胞进行定量检测；
将活化的所述金电极置于100~150µL的1mM杯[4]芳烃水溶液中，在4℃条件下修饰8~10小时；4℃条件下与100~150µL的CD44抗体溶液偶联2~3小时得到所述的抗体功能化的金电极；
分别取2.5µL、100µM的SEQ ID No 2~5所示序列的溶液混匀后在95℃±0.5℃水浴条件下反应5min~10min，然后自然冷却得到所述的DNA组装体。
3.根据权利要求1或2所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的目标细胞为间充质干细胞时，细胞浓度的对数值与检测体系0.216V处的电化学信号值之间呈良好的线性关系，线性方程为Y=1.07034 lgC间充质干细胞-1.22915，R2=0.989，检测限为30个细胞。
4.根据权利要求1或2所述的检测细胞的方法，其特征在于所述的寡核苷酸其序列如SEQ ID No 1所示。
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