[发明专利]一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法与应用

说明书

一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法与应用，属于荧光免疫检测技术领域。为了更快速、稳定、准确检测旋毛虫感染，本发明提供了一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂由旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML‑ESP抗原与旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML‑ESP抗原组成的旋毛虫肌幼虫ES混合抗原；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG，将上述各组分组合后制备成试纸条，本发明可用于猪旋毛虫病的快速检测。

技术领域

本发明属于荧光免疫检测技术领域，具体涉及一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

旋毛虫病是一种危害非常严重的人兽共患病，其不但可给畜牧业生产造成巨大的经济损失，而且对人类身体健康也构成巨大威胁，人或动物主要通过生食或半生食含有旋毛虫的肉类(主要为猪肉)而发病。

对于屠宰动物旋毛虫病的检验，国际动物卫生组织(OIE)的法规检验方法为镜检法及集样消化法，目前我国也在延用这两种方法。然而以上两方法均存在一定的弊端，镜检法费时费力而且敏感性差，其敏感性为肉中虫体密度达到每克3条虫体时方可检出。集样消化法虽可大大提高检出率，将虫体检出率提高至每克肉1条虫体，但该方法仍十分繁琐，在发现阳性样品时仍需对阳性组采用消化法进行逐头检测。从敏感性的角度来看，由镜检法和集样消化法所造成漏检的肉类均存在安全隐患并可引起人类的感染(摄入75条虫体即可引起人的感染)。国内外学者对旋毛虫检测的方法进行了大量的研究，如应用间接荧光免疫试验，免疫酶染色试验，免疫印迹试验，免疫吸附试验(ELISA)等技术来检测旋毛虫抗体，但这些方法操作较复杂，常需要2-3个小时检测出结果，而且需要昂贵的仪器和专业技能人员在实验室完成，不能应用于现场和基层单位进行猪旋毛虫病的检测。

免疫层析试纸快速检测技术(ILFST)是在单克隆抗体技术、免疫层析技术、新材料及标记技术基础上发展起来的一种新型免疫学快速检测技术。免疫层析试纸条不需要专业技能和昂贵复杂的仪器设备，快速性、易用性、低成本和无需设备性等优点使其广泛应用于激素、病原微生物、肿瘤标记物、违禁药品、兽药、农药等靶标的快速检测，是理想的免疫学快速检测技术之一。该技术可实现现场实时检测，尤其适用于医院、兽医临床、检验检疫等领域，具有广泛的应用前景。

免疫标记是对抗体或抗原进行标记，通过标记物的增强放大效应显示反应系统对应的抗原或抗体的相对含量。免疫标记根据其标记原理可分为两大类，一类是以酶促反应为基础的酶标记法，另一类是自显色标记法。免疫层析检测过程中，标记物是影响其敏感性的主要因素之一。而对于不需要仪器辅助的免疫层析试纸，主要是自显色标记物。目前应用较为成熟的是胶体金标记。但由于胶体金检测在灵敏度和准确度上的限制，只能用于一些要求低的检测项目中。

发明内容

为了更快速、稳定、准确检测猪旋毛虫感染情况，本发明提供了一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条来检测旋毛虫抗体，所述旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述样品垫上设置有加样孔；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂有旋毛虫肌幼虫ES混合抗原，所述旋毛虫肌幼虫ES混合抗原由旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原与旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原组成；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG。

进一步地限定，所述样品垫材质为玻璃纤维素膜XQ-Y8；所述结合垫材质为玻璃纤维素膜Ahistrom8964；所述层析膜材质为硝酸纤维素膜Millipore135。

本发明还提供了上述旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

1)旋毛虫肌幼虫ES混合抗原制备：将旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原及旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原，按照1:1的质量比混合，获得旋毛虫肌幼虫ES抗原；