[发明专利]用于微生态制剂体外活性评价的微生物群落共培养装置及评价方法

权利要求书

1.用于微生态制剂体外活性评价的微生物群落共培养装置，其特征在于，包括纯培养管（1）和共培养盘（2），所述纯培养管（1）通过连接管（3）和共培养盘（2）连接；所述共培养盘（2）的上壁有培养基采样口（5）和培养基回注口（6），所述培养基采样口（5）和培养基回注口（6）的上部有小透气胶塞（7）；所述连接管（3）上有连通阀（4）；所述纯培养管（1）的直径为4cm，高度为11cm，在高度为7-9cm处设置刻度线（17）；共培养盘（2）的直径为10cm，高度为2.5cm；连接管（3）直径5mm，长度3cm；

所述纯培养管（1）连接除氧器（9），所述除氧器（9）由除氧剂室（10）通过滤膜（11）和纯培养管盖（12）组成，纯培养盖（12）上还有减压囊（13）；所述除氧剂室（10）和纯培养管盖（12）材质为pvc，除氧剂室（10）和纯培养管盖（12）连接处有pp材质的过滤膜（11）。

2.根据权利要求1所述的共培养装置，其特征在于，所述共培养盘（2）周围的连接管（3）均匀分布，连接管的数量为4-14个；所述培养基采样口（5）和培养基回注口（6）直径为5mm。

3.根据权利要求1或2所述的共培养装置，其特征在于，所述纯培养管（1）的上部有胶塞（8）；所述胶塞（8）为透气或半透气。

4.根据权利要求1所述的共培养装置，其特征在于，所述纯培养管盖（12）和纯培养管（1）采用密封橡胶圈（16）连接。

5.一种微生物菌落共培养的评价方法，其特征在于，采用以下步骤：

（1）将权利要求1-4任一项所述的共培养系统置于生物安全柜内，从任意纯培养管（1）加液体培养基，平行设定样品组和对照组，其中样品组为含有药物的培养基，并混合均匀；对照组为不加药物的培养基；待培养基在培养盘（2）和纯培养管（1）分配均匀，纯培养管（1）中培养基达到刻度线（17），关闭连通阀（4）；

（2）在纯培养管（1）中接种相应的试验微生物，将共培养装置移入培养箱中，先预培养0.5-1小时后，然后打开连通阀，10~20r/min振荡培养；

步骤（2）所述的接种完成后，需要厌氧条件的微生物，用透气胶塞（8）封口纯培养管（1）口，然后将除氧器（9）连接纯培养管（1），形成厌氧条件，除氧器（9）的除氧剂室（10）中有厌氧指示剂（14）；需要微需氧条件的微生物，用半透气胶塞（8）封口纯培养管（1）口，形成微需氧条件；需要有氧条件的微生物，用透气胶塞（8）封口纯培养管（1）口；

（3）对培养物中各试验微生物进行计数，计算样品组中各微生物的lg增加值或减少值；

（4）采用χ2检验的方法检验对照组和样品组益生菌和有害菌构成比，评价药物对微生物菌群的作用效果；其中步骤（4）所述的检验方法的具体步骤为：

①培养结束后，计数分析对照组和样品组培养物中各微生物的含量；

②与对照组比较，计算样品组每1ml培养物中，各微生物的对数增加值或减少值；

③对每10ml中，样品组和对照组中有害菌、益生菌的构成比进行χ2检验；

④根据结果判定标准进行结果判断；其中结果判定标准为：

。

6.根据权利要求5所述的评价方法，其特征在于，所述培养过程中从培养基采样口（5）取样，取样量为1~5ml，取样同时，自培养基回注口（6）加入取样量同体积的无菌培养基。

7.根据权利要求5或6所述的评价方法，其特征在于，所述的液体培养基的配方为：胰蛋白胨15g，大豆木瓜蛋白水解物3g，牛肉膏粉3g，酵母膏粉10g，葡萄糖10g，乳糖5g，麦芽糖1.5g，纤维二糖1.5g，可溶性淀粉1g，甘露醇0.5g，半胱氨酸-盐酸0.25g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.5g，碳酸氢钠6g，氯化钙0.15g，硫酸镁0.1g，醋酸钠0.15g，柠檬酸铵0.1g，硫酸亚铁0.02g，硫酸锰0.02g，硫酸锌0.02g，硫酸铜0.01g，维生素K₁0.5ml，氯化钠2g，叶酸1mg，烟酸1mg，生物素2mg，加入500ml牛肠浸提液，蒸馏水500ml。