[发明专利]一种基于核酸内切酶的快速WGS建库方法

权利要求书

1.一种制备DNA文库的方法，依次包括如下步骤：

(1)采用核酸内切酶进行打断；所述核酸内切酶具有在双链DNA上产生单链切口的活性；

(2)进行末端补平和加A；本步骤中同时采用Taq-Klenow和DNA聚合酶；所述DNA聚合酶满足如下两个条件：①不具有链置换活性和5’-3’外切酶活性；②具有3’-5’外切酶活性；

(3)完成步骤(2)后，不进行纯化，直接进行加接头。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，利用二硫苏糖醇灭活步骤(1)的产物中的核酸内切酶。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤(4)：完成步骤(3)后，进行PCR扩增。

4.一种针对采用核酸内切酶进行打断的DNA建库方法中防止核酸内切酶产生的单链缺口进一步断裂的方法，包括如下步骤：进行末端补平和加A时，同时采用Taq-Klenow和DNA聚合酶；

所述核酸内切酶具有在双链DNA上产生单链切口的活性；

所述DNA聚合酶满足如下两个条件：①不具有链置换活性和5’-3’外切酶活性；②具有3’-5’外切酶活性。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：进行末端补平和加A时，利用二硫苏糖醇灭活打断产物中的核酸内切酶。

6.一种制备DNA文库的试剂盒，包括如下组分：核酸内切酶、Taq-Klenow和DNA聚合酶；

所述核酸内切酶具有在双链DNA上产生单链切口的活性；

所述DNA聚合酶满足如下两个条件：①不具有链置换活性和5’-3’外切酶活性；②具有3’-5’外切酶活性。

7.如权利要求6所述的试剂盒，所述试剂盒还包括二硫苏糖醇。

8.如权利要求1或2或3或4或5所述的方法，或者，如权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于：所述核酸内切酶为DNA双链内切酶；

优选地，所述核酸内切酶为NEBNext DNA双链片段化酶或嗜盐弧菌核酸酶。

9.如权利要求1或2或3或4或5所述的方法，或者，如权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为T4 DNA聚合酶。

10.权利要求1或2或3或4或5或8或9所述的方法，或者，权利要求6或7或8或9所述的试剂盒，在DNA测序中的应用。