[发明专利]一种P物质诱导的过敏性哮喘动物模型的构建方法和筛选药物的方法

说明书

本发明公开了一种P物质诱导的过敏性哮喘动物模型的构建方法和筛选药物的方法，1)将P物质用生理盐水配制成浓度为30μg/mL的P物质致敏溶液；2)在第1天给小鼠通过雾化吸入4mL的P物质致敏溶液激发哮喘，吸入时间为20min；3)间隔一天重复上述步骤2)操作，即在第3、5、7天重复步骤2)操作；4)在第7天雾化吸入激发哮喘结束后，在24小时内测定小鼠肺功能相关指标，经过数据分析符合哮喘动物模型指标，即说明模型成功构建。本发明构建方法操作简单，不需要麻醉。采用上述过敏性哮喘动物模型，动物反应性好，适合研究过敏性哮喘发生过程中体内炎症因子水平的变化及信号传递的通路，可用于筛选发现新的治疗哮喘的药物等研究。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种动物模型构建方法，尤其是一种P物质诱导的过敏性哮喘动物模型的构建方法和筛选药物的方法。

背景技术

过敏性哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症，在易感者中此种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，多在夜间和(或)凌晨发生，气道对多种刺激因子反应性增高。但症状可自行或经治疗缓解。近十余年来，美国、英国、澳大利亚、新西兰等国家哮喘患病率和死亡率有上升趋势，全世界约有一亿哮喘患者，已成为严重威胁公众健康的一种主要慢性疾病。中国哮喘的患病率约为1％，儿童可达3％，据测算全国约有1千万以上哮喘患者。当前经典理论一般认为过敏性哮喘是致敏原吸入后和支气管粘膜肥大细胞表面受体上的特异性IgE结合，导致肥大细胞脱颗粒释放活性物质如组胺、白三烯等引起支气管平滑肌收缩所致。肥大细胞同时也释放具有趋化活性的物质，促使炎症细胞主要是嗜酸性白细胞聚集到肺部支气管参与过敏性炎症过程。

类过敏反应由于与Ⅰ型过敏反应症状相似，机制与肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒、激活补体系统，引起释放组胺或其他血管活性因子等生物活性介质有关，常被混称为Ⅰ型过敏反应，但两者却有不同的发生机制。通常类过敏反应起病比较急，短期暴露于致敏原下即迅速出现，不需要提前接触抗原的致敏过程，抗体或淋巴细胞不参与反应过程，无需IgE等免疫球蛋白介导，患者血清的IgE浓度也未见升高，具有病情危急的特点，首次给药即可发生严重ADR及休克。

P物质是一种广泛分布于细神经纤维内的神经肽。当神经末梢收到刺激时，便释放P物质于其特异性受体NK1结合。P物质不需要IgE的参与，可通过 MRGPRX2直接激活肥大细胞，引起胞内Ca²⁺动员和细胞脱颗粒，释放组胺。同时还具有对单核细胞，嗜酸性粒细胞的趋化作用，调节细胞因子的产生。故P物质是一种潜在的引起过敏性性哮喘的神经肽。

近年来，临床上遇到大量有哮喘症状，但血清IgE并未升高的患者。对其血清中P物质进行检测，发现有着明显升高。因此，建立一种不经过IgE途径，以 P物质为致敏物质的哮喘模型迫在眉睫。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种P物质诱导的过敏性哮喘动物模型的构建方法和筛选药物的方法，通过该方法可以成功构建过敏性哮喘动物模型，该动物模型无需二次接触致敏物质，不经过IgE介导，首次接触即可引发哮喘。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开的一种P物质诱导的过敏性哮喘动物模型的构建方法，包括以下步骤：

1)将P物质用生理盐水配制成浓度为10～90μg/mL的P物质致敏溶液；

2)在第1天给小鼠通过雾化吸入1～6mL的P物质致敏溶液激发哮喘，吸入时间为20min；

3)间隔一天重复上述步骤2)操作；