[发明专利]多元核酸检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种多元核酸检测方法及试剂盒，方法包括：设计DNA轨道和DNA步行者，将不同的DNA轨道偶联到不同的荧光编码微球上；以DNA步行者为模板、DNA轨道为引物进行DNA行走反应，其中样本所含的靶标核酸能够触发荧光编码微球表面DNA行走；对荧光编码微球表面DNA行走产物进行荧光标记；使用流式细胞仪对荧光编码微球进行荧光检测，获得样本中靶标核酸的含量。本发明还公开了一种多元核酸检测试剂盒。本发明将DNA行走和荧光编码微球相结合，实现核酸快速、高灵敏和多元检测，为检测核酸如miRNA提供了新方法。

技术领域

本发明涉及核酸检测，尤其涉及一种多元核酸检测方法及试剂盒。

背景技术

肺癌是一种常见的癌症，较高死亡率的非小细胞肺癌约占85％的肺癌病例。检测肿瘤标志物被认为是肺癌早期诊断的一种可行方法。在非小细胞肺癌的肿瘤标志物中，循环肿瘤细胞不具有一致性，需要复杂的富集和分离程序；循环DNA具有假阴性；循环miRNA具有高稳定性和高可重复性。因此，血液中的循环miRNA成为非小细胞肺癌理想的非入侵式诊断的生物标志物。目前的检测方法存在耗时长和灵敏度不足的问题。

DNA分子具有自组装性、可编程性和可预测性等特性，可构建仿生的DNA机器。DNA机器在适当的触发下发生响应，改变器件状态，对痕量级生物分子表现出优异的传感性能。DNA行走是一类DNA机器，利用步行者DNA在轨道上持续地迁移，实现高效的信号放大。利用DNA行走检测核酸具有高效性和自动化的优点。目前，DNA行走已应用于离子、核酸和蛋白质等传感分析。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种多元核酸检测方法，该方法可以快速、灵敏和多元检测核酸如循环miRNA，本发明还提供了相应的检测试剂盒。

技术方案：本发明所述的用于非疾病诊断目的的多元核酸检测方法，包括：

(1)设计DNA轨道，将不同的DNA轨道偶联到不同的荧光编码微球上，所述DNA轨道与对应的DNA步行者特异性杂交，不同的荧光编码微球具有不同的可识别荧光信号；

针对不同靶标核酸，设计与对应靶标序列特异性杂交的DNA步行者，所述DNA步行者的核酸二级结构为茎环结构，包括用于与靶标核酸互补杂交打开茎环结构的靶标识别区以及与对应DNA轨道杂交的DNA轨道识别区；

(2)以DNA步行者为模板、DNA轨道为引物进行DNA行走反应，待检测样本所含的靶标核酸能够触发荧光编码微球表面DNA行走；

(3)对荧光编码微球表面DNA行走产物进行荧光标记，该荧光标记与微球本身的荧光编码相区别；

(4)使用流式细胞仪对荧光编码微球进行荧光检测，获得样本中靶标核酸的含量。

所述靶标核酸可以为DNA、RNA，进一步的对microRNA如循环microRNA具有优异的检测效果。

所述荧光编码微球的表面羧基化修饰，所述DNA轨道的5'端修饰氨基，所述DNA步行者的5'端修饰生物素，所述荧光标记的荧光基团为链霉亲和素修饰的荧光染料。

不同荧光编码微球由两种荧光颜色不同荧光强度实现编码。