[发明专利]一种从炮制桑枝中同时提取并分别纯化5种化学成分的方法及其应用

说明书

本发明属于分析化学技术领域，具体地说是一种从炮制桑枝中同时提取并分别纯化5种化学成分的方法及其应用。本发明采用高效液相色谱方法，在色谱柱：Stamsil C18(250mm×4.6mm i.d，5μm)，流动相组成：流动相A为乙腈，流动相B为含0.1%磷酸的水溶液；流速：0.8L/min，检测波长330nm；柱温：26℃；进样量：20μL的检测条件下分别建立了从炮制桑枝中同时提取并分别纯化5种化学成分的方法。本发明的5种化学成分含量测定方法具有良好的分析评价能力，有简便、稳定、准确等优势，可为评价桑枝药材的质量提供方法依据。该研究为进一步药效研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体地说是一种从炮制桑枝中同时提取并分别纯化5种化学成分的方法及其应用。

背景技术

2015年版药典记载其为桑科植物桑(Morus albaL.)的干燥嫩枝。春末夏初采收，去叶，晒干，或趁鲜切片，晒干。桑枝中起主要药理活性作用的成分为桑枝多糖、黄酮类和生物碱类成分。药理活性主要包括降低血脂、降血糖、抗炎作用以及多糖免疫作用等。

本发明采用高效液相色谱(HPLC)法对中药桑枝中的5种成分(桑皮苷A、绿原酸、白藜芦醇苷、白藜芦醇、桑辛素)同时进行含量测定，并对不同桑枝炮制品进行测定，为桑枝进一步药效研究奠定了基础，同时为中药桑枝的质量控制提供方法学支持和数据参考。

发明内容

本发明的目的是提供一种从炮制桑枝中同时提取并分别纯化5种化学成分的方法，可以对中药桑枝中的5种成分(桑皮苷A、绿原酸、白藜芦醇苷、白藜芦醇、桑辛素)同时进行含量测定。

本发明提供的技术方案为：

一种从炮制桑枝中同时提取并分别纯化5种化学成分的方法，包括以下步骤：

(1)分别配制对照品溶液和供试品溶液；

(2)检测波长的选择：取桑皮苷A、绿原酸、白藜芦醇苷、白藜芦醇和桑辛素的对照品溶液在波长200-800nm范围内扫描，发现桑皮苷A、绿原酸在326nm处有最大吸收，白藜芦醇苷、白藜芦醇在328nm处有最大吸收，桑辛素在269nm处有最大吸收，最终选择峰数较多，分离较好，信号响应强度适当的波长作为最佳检测波长；

(3)采用高效液相色谱方法，高效液相色谱条件为：

色谱柱：Stamsil C18(250mm×4.6mm i.d，5μm)，

流动相组成：流动相A为乙腈，流动相B为含0.1％磷酸的水溶液；

流速：0.8L/min，

检测波长330nm；

柱温：26℃；

进样量：20μL；

(4)建立标准曲线，求出桑枝生品中桑皮苷A、绿原酸、白藜芦醇苷、白藜芦醇和桑辛素的含量。

作为优选，所述对照品溶液的制备方法如下：分别精密称取桑皮苷A对照品、绿原酸对照品、白藜芦醇苷对照品、白藜芦醇对照品和桑辛素对照品，加甲醇配成浓度分别为0.72、0.24、0.21、0.25和0.74mg/mL的混合对照品溶液，作为储备液。

作为优选，所述供试品溶液的制备方法如下：精密称取桑枝生品粉末1.0021g，置具塞锥形瓶中，加25mL 80％甲醇，超声处理(功率250kW，频率40kHz)30min过滤，滤渣用相同方法继续提取1次，过滤，合并提取液，蒸干；残渣用甲醇溶解，并定容置于4mL容量瓶中，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，滤液供HPLC分析。

作为优选，所述流动相按照梯度进行洗脱。

作为优选，所述最佳吸收波长为330nm。