[发明专利]狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法

权利要求书

1.狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，用于对待测样品中的狂犬病毒灭活抗原进行定量检测，其特征在于：包括下述步骤：

（1）对目标峰进行定性鉴定

（2）待测样品进行离心澄清；所述待测样品选自含狂犬病毒灭活抗原的悬浮培养液、分离纯化液或抗原成品中的任意一种；

（3）用蛋白定量试剂盒测定标准品中抗原浓度；

（4）取标准品进行系列稀释，用高效液相色谱（HPLC）法进行检测，建立以峰面积为横坐标、浓度为纵坐标的线性回归方程；

（5）对待测样品用步骤（4）所述的高效液相色谱（HPLC）法进行检测得到对应的峰面积；

（6）根据线性回归方程及样品中狂犬抗原的峰面积计算得到待测样品中的狂犬病毒灭活抗原浓度；

其中，（4）、（5）中所使用的高效液相色谱法使用的色谱柱为凝胶色谱柱，检测器为紫外检测器，其检测波长为280nm；所述高效液相色谱法的流动相为含10mM磷酸氢二钠、40mM磷酸二氢钠和0.1M 硫酸钠，pH为7.2的缓冲液；所述流动相的流速为0.5-1.0ml/min；所述凝胶色谱柱为Thermo Bio Basic SEC-1000或TSKgel G4000SW_XL或TSKgel G6000 PW_XL。

2.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：进样量为50µl；所述流动相的流速为0.6ml/min；所述狂犬病毒灭活抗原在色谱上的保留时间为19.9min。

3.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：

步骤（1）中，采用SDS-PAGE法、透射电子显微镜（TEM）法对目标峰进行定性鉴定。

4.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：

步骤（2）中，所述待测样品采用10000r/min离心5分钟进行澄清。

5.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：

步骤（3）中，用Lorry法蛋白定量试剂盒测定标准品中抗原浓度。

6.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：

步骤（4）中，取蛋白含量已被确定的狂犬病毒灭活抗原标准品进行系列稀释，并对稀释后的系列标准品进行色谱检测，建立以峰面积为横坐标、浓度为纵坐标的线性回归方程，R²应大于0.99。