[发明专利]交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法

权利要求书

1.一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）种子培养：从固体平板上刮取藻种接种于装有种子培养基的光生物反应器中，控制一定培养条件进行种子培养。

2）发酵培养：将步骤1）的种子接入装有发酵培养基的光生物反应器中进行发酵培养，待发酵培养基中初始氮源浓度降至一定浓度时，开始脉冲流加发酵培养基浓缩液；同时通过总有机碳分析仪测定，待培养液中初始有机碳源浓度耗尽时，向培养液中脉冲流加有机碳源，从而让藻细胞不断处于兼养-自养交替状态。

2.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：步骤1）中，种子培养基组成为：硝酸钠0.5~1.5 g/L，乙酸钠0-3g/L，磷酸氢二钾0.015~0.06 g/L，七水硫酸镁0.035~0.15 g/L，柠檬酸0.003-0.018 g/L，碳酸钠0.01-0.06 g/L，二水氯化钙0.02~0.09 g/L，柠檬酸铁铵0.003~0.015 g/L，乙二胺四乙酸二钠0.001-0.005 g/L，硼酸1.5-6 mg/L，四水氯化锰1-5 mg/L，七水硫酸锌0.1-0.5mg/L，二水钼酸钠0.2-0.8 mg/L，无水硫酸铜0.04-0.16 mg/L，六水硝酸钴0.02-0.10 mg/L。

3.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：步骤1）中，培养条件为：控制反应器中藻细胞初始浓度为50~150 mg/L，培养过程中，温度控制在25~38℃，光照强度控制在100~500μmol/m²/s，在所通气体中二氧化碳浓度保持在1%~5%，通气量控制在0.1~0.5 VVM，培养2~4天。

4.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：步骤2）中，发酵培养基组成为：包括初始氮源，控制氮浓度100~250 mg/L，乙酸钠1-3 g/L，磷酸氢二钾0.015~0.06 g/L，七水硫酸镁0.035~0.15 g/L，柠檬酸0.003-0.018 g/L，碳酸钠0.01-0.06 g/L，二水氯化钙0.02~0.09 g/L，柠檬酸铁铵0.003~0.015 g/L，乙二胺四乙酸二钠0.001-0.005 g/L，硼酸1.5-6 mg/L，四水氯化锰1-5 mg/L，七水硫酸锌0.1-0.5 mg/L，二水钼酸钠0.2-0.8 mg/L，无水硫酸铜0.04-0.16 mg/L，六水硝酸钴0.02-0.10 mg/L。

5.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：在步骤2）中，培养条件为：以1~10% (v/v)的接种量接入装有发酵培养基的光生物反应器中，温度控制在25~38℃，在所通气体中二氧化碳浓度保持在1%~5%，通气量控制在0.1~0.5 VVM，光照强度控制在100~900μmol/m²/s。

6.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：在步骤2）中，待发酵培养基中初始氮源浓度降至5~15 mg/L时，开始脉冲流加发酵培养基浓缩液。

7.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：在步骤2）中，有机碳源为乙酸钠；待初始乙酸钠浓度耗尽时，每间隔6-48 h，向培养液中脉冲流加乙酸钠溶液，使得培养液中的乙酸钠浓度达到0.5-2 g/L，从而让藻细胞不断处于兼养-自养交替状态。

8.如权利要求1所述的一种采用兼养-自养交替培养模式同步提高微藻叶黄素和蛋白质产量的方法，其特征在于：在步骤2）中，发酵培养基中的初始氮源种类为硝酸钠、硝酸钾、氯化铵、硫酸铵、碳酸氢铵、硝酸铵、尿素中的一种。