[发明专利]兰科植物种子萌发、壮苗生根培养基及一步成苗组培方法

说明书

本发明公开了兰科植物种子萌发、壮苗生根培养基及一步成苗组培方法。其通过向现有液体组培配方中加入凝固剂，并将凝固剂的浓度调至合适区间，使培养基对种子具有支撑能力，在培养基上悬浮培养诱导兰科植物种子萌发为圆球茎或提高种子在培养基中培养的时间至合适的区间，圆球茎会分化得分化苗；将漂浮在液面上的圆球茎或分化苗直接转移到铺有支撑物的液体培养基上一步成苗。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及兰科植物种子萌发、壮苗生根培养基及一步成苗组培方法。

背景技术

利用固体琼脂培养基对兰科植物的种子进行离体萌发培养的方法已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一定的缺点，比如在培养的过程中，植物的种子诱导圆球茎生长过程中的营养成分和产生的代谢物呈现一个梯度分布，从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变，植物生长慢且个体小，利用液体培养基可以克服这一缺点。

振荡悬浮培养，需要增加振荡或者转动的装置，使细胞始终处于分散悬浮营养液面上。专利报道的一种寒兰种子萌发的方法，该方法采用将海绵浸泡在营养液中，使海绵完全浸湿后，将沾有营养液的海绵块移到培养瓶底部，再将种子均匀播种在海绵表面上，该方法萌发的种子，后期营养液不够，植物生长受限。

目前兰科植物的组培快繁主要采用在固体培养基上诱导种子萌发形成圆球茎，然后在分化培养基上诱导圆球茎分化成丛生苗，最后在壮苗培养基上进行丛生苗生根壮苗培养，操作流程较多，且转接分化工段繁琐且费时。相关专利有报道采用液体培养基诱导白芨种子萌发的方法，种子萌发培养20d后，将圆球茎转接到固体培养基上进行分化和壮苗生根培养。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种兰科植物种子萌发、壮苗生根培养基及一步成苗组培方法，其通过向现有液体组培配方中加入凝固剂，并将凝固剂的浓度调至合适区间，使培养基对种子具有支撑能力，在培养基上悬浮培养诱导兰科植物种子萌发成圆球茎或分化苗；将悬浮圆球茎或分化苗直接转移到铺有支撑物的液体培养基上一步成苗。

本发明采取的具体技术方案是：

一种兰科植物种子萌发、壮苗生根培养基，所述培养基为液体培养基中加入限定量凝固剂的非固体培养基，凝固剂的浓度为0.25～6g/L。

为了更好的实现本发明，所述凝固剂为琼脂或琼脂糖或卡拉胶，琼脂的浓度为0.5～5.5g/L，琼脂糖浓度为0.25～4.5g/L，卡拉胶浓度为1～6g/L。

为了更好的实现本发明，所述种子萌发培养基具体配方组成为：MS+琼脂0.5～5.5g/L或琼脂糖0.25～4.5g/L或卡拉胶1～6g/L+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖30g/L，培养基pH为5.4～6.0。

为了更好的实现本发明，所述壮苗生根培养基具体配方组成为：MS+琼脂0.5～5.5g/L或琼脂糖0.25～4.5g/L或卡拉胶1～6g/L+TDZ 0.6mg/L+2,4-D0.3mg/L+KT 0.3mg/L+蔗糖30g/L，培养基pH为5.4～6.0。

相应地，本发明还提供了一种兰科植物种子萌发培养方法，所述培养方法为悬浮培养方法，具体包括如下步骤：

(1)种子处理：在超净工作台上用纱布将种子包裹住，75％酒精消毒15～30s，0.1％氯化汞消毒3～5min，无菌水漂洗3次；

(2)配制种子萌发培养基，所述培养基配方组成为：MS+琼脂0.5～5.5g/L或琼脂糖0.25～4.5g/L或卡拉胶1～6g/L+6-BA 2mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖30g/L，培养基pH为5.4～6.0；将种子萌发培养基倒入组培容器中，高温高压灭菌，冷却后；将消毒好的种子均匀的混合在种子萌发培养基里；