[发明专利]一种新藤黄酸分离及其制备N-芳基新藤黄酰胺的方法

说明书

本发明公开了一种新藤黄酸分离及其制备N‑芳基新藤黄酰胺的方法，利用洗脱剂，以硅胶H作固定相，经两次干柱逆流层析即能低成本、简便、较大规模地分离出纯度96％的新藤黄酸(GNA)样品。室温、常压磁力搅拌下,1‑乙基‑3‑(3‑N,N‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(或二环己基碳二亚胺)和4‑N,N‑二甲氨基吡啶催化新藤黄酸与取代芳胺的酰胺化反应。粗产物经硅胶H作固定相的干柱逆流层析即能低成本、简便、较大规模地制备出高纯度、未见文献报道的N‑芳基新藤黄酰胺样品。

技术领域

本发明涉及一种新藤黄酸分离及其制备N-芳基新藤黄酰胺的方法。

背景技术

新藤黄酸(GNA)体内外均能有效抑制肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤的生长，有望开发成为抗肿瘤的一类新药。但它在药材藤黄中含量较低、且与多个相似结构的成分共存。现有的新藤黄酸分离方法不能简便、低成本、高效率地分离出高纯度的新藤黄酸。

另外GNA的血管刺激性强、水溶性差、体内半衰期短、低活性、不良稳定性等缺点，也是限制该类药物研发的瓶颈。通过酰胺键分子中引入亲水性基团和药效团，可望增强该类实体的生物活性、提高水溶性、减小血管刺激性、改善大鼠体内的药物代谢动力学过程等。

GNA提取分离困难、生物利用度低等，均是限制该类药物研发的瓶颈。目前，新藤黄酸的分离大都采用多次硅胶柱层析、大孔树脂法分离的方法，但该两种方法均存在严重的死吸附、耗时长、有机试剂使用较多且步骤繁琐并增加分离成本等问题。制备液相色谱方法新藤黄酸分离时上样量小、成本高，并限制了新藤黄酸样品的制备规模。售价50-60万人民币的高速逆流色谱仪，也不是一般实验室都能负担起的。另外，至今还没有N-芳基新藤黄酰胺制备方面的文献报道。因此，迫切需求可以简便、较大规模地分离新藤黄酸及其新法制得的N-芳基酰胺的技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从藤黄提取物滤出藤黄酸吡啶盐的母液中分离出高纯度新藤黄酸的方法。该方法采用逆流硅胶干柱层析法，简单、方便，适合规模化生产。

本发明的另一目的在于利用分离得到的新藤黄酸，制备出高纯度的N-芳基新藤黄酰胺的方法。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明采用逆流干柱层析，通过干柱层析技术中待分离样品装在层析用硅胶的下端，洗脱剂从样品的下端引入并按由下至上的流动方向逐步将被分离的化合物按极性大小的顺序在硅胶中排列开来的分离方法。

一种从藤黄提取物滤出藤黄酸吡啶盐的母液中分离出高纯度新藤黄酸的方法，包括以下步骤：

1)在带透砂板的层析柱中依次填充粗硅胶、硅胶拌样、硅胶H后，水泵抽实；

2)打开装有洗脱剂的分液漏斗活塞，洗脱剂逆流干柱柱层析直至洗脱剂前沿跑过硅胶H最上端，样品在硅胶H上分出数条色带；

3)取下色谱柱在底端连接打气筒并将硅胶吹出到干净托盘中，将与薄层层析中新藤黄酸对应的谱带均匀分成3-5段，且每段取样薄层层析法检测其中GNA的纯度；

4)分别合并以上含藤黄酸纯品、较纯品的硅胶H，95％乙醇洗净各段硅胶中的新藤黄酸、溶液浓缩即得。

进一步的，所述的粗硅胶和硅胶H的高度与层析柱内径比大于8:1，所述的硅胶和硅胶H与待分离样品重量比为80-120:1。

进一步的，所述的洗脱剂逆流按1-5cm/min高度的速度进行。

进一步的，所述的洗脱剂体系包括二氯甲烷-乙醇-丙酮-三乙胺体系和二氯甲烷-丙酮-乙酸乙酯体系，其中，二氯甲烷-乙醇-丙酮-三乙胺中各组分的体积比为4:0.7:0.3:3.6，二氯甲烷-丙酮-乙酸乙酯中各组分的体积比为3:0.2:3。