[发明专利]一种通过检测肌酐和1-甲基海因含量推断水中尸体浸没时间的方法

权利要求书

1.一种通过检测肌酐和1-甲基海因(1-Methylhydantoin, 1-MH)含量推断水中尸体浸没时间的方法，包括如下步骤：

（1）实验动物心血和骨骼肌中肌酐和1-MH含量检测方法开发；

（2）建立不同温度和水体环境下水中尸体动物模型；

（3）用（1）中建立的方法检测（2）中建立的模型的水中尸体心血和骨骼肌中肌酐和1-MH的含量；

（4）根据（3）中水中尸体心血和骨骼肌中肌酐和1-MH的含量，绘制出肌酐降解曲线C_肌酐-PMSI曲线和1-MH生成曲线C_1-MH-PMSI；

（5）通过（4）中得到的C_1-MH-PMSI曲线推断水中尸体浸没时间；

所述（1）中实验动物心血和骨骼肌中肌酐和1-MH含量检测方法的建立，包括以下步骤：购置肌酐、1-MH对照品，建立高效液相色谱-质谱联用HPLC-MS/MS检测方法，采用的检测方法条件如下：Agilent 1260-6420三重串联四级杆液质联用仪；色谱柱：Agilent Zorbax SBC18，2.1mm×50mm，1.8μm；流动相：0.1%甲酸溶液：乙腈的体积比为30：70；流速0.20mL/min；进样体积1μL；ESI离子源正离子模式；干燥气温度350℃；干燥气流速10L/min；雾化器压力50psi；毛细管出口电压180V；碰撞电压30V；多反应监测MRM模式；肌酐检测的离子对为m/z114.0→86.2，m/z 114.0→44.2；1-MH检测的离子对为m/z 115.1→87.0，m/z 115.1→44.0；样品处理过程：取大鼠心血100μL或将0.1g大鼠骨骼肌匀浆后加入500μL乙腈，混合3min，用高速离心机13000 r/min离心10 min，取上清液200μL进样分析；

所述（2）中不同温度和水体环境下水中尸体动物模型建立，包括以下步骤：将实验用大鼠分为自然淡水环境死后抛尸入水组和自然淡水控温死后抛尸入水组；自然淡水环境死后抛尸入水组是在平均气温为25℃的夏季条件下，取雄性SD大鼠90只，随机分为15组，每组6只；用颈椎脱位的方法处死大鼠，在自然淡水环境中将大鼠分别放置24、48、60、72、84、96、108、120、132、144、156、168、180、192、204 h后捞出进行解剖取材，并用全自动温湿度记录仪连续采集实验过程中的水体温度和附近的气温；浸泡过程中逐一打捞解剖取大鼠心血、肝、脾、肺、肾、双腿腓肠肌、骨骼肌、玻璃体液，并于-80℃保存检材；自然淡水控温死后抛尸入水组是将河水放置于大型塑料容器中，并用空调控制水温在25℃，将大鼠颈椎脱位处死后在恒温条件下浸泡；实验动物数目、分组情况和取材时间点同自然淡水环境组；浸泡过程中逐一打捞解剖取大鼠心血、肝、脾、肺、肾、双腿腓肠肌、骨骼肌、玻璃体液，并于-80℃保存检材。