[发明专利]一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法

说明书

本发明公开了一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法，将羽毛针禾的种子烘干去除颖果果皮，用无菌水冲洗；之后用乙醇水溶液浸泡，再用次氯酸钠浸泡并用无菌水冲洗；之后先在MS培养基或者诱导培养基中预培养，再用诱导培养基培养出愈伤组织，最后将愈伤组织扩大培养；诱导培养基配置。诱导培养基配置如下：以pH是5.8～6的MS为基础培养基，添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为1～2mg/L、酪蛋白水解产物45～55mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L，配制得到诱导培养基。扩大培养基配置如下：以pH是5.8～6的MS为基础培养基,添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为0.25～1mg/L、酪蛋白水解产物50～100mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L。

技术领域

本发明属于分子生物学和农业技术领域，具体涉及一种大量培养禾本科羽毛针禾愈伤组织的方法。

背景技术

羽毛针禾(Stipagrostis pennata)，又名羽毛三芒草(Aristida Pennata)，其形态特点是：秆直立、丛生、光滑无毛；株高30～70厘米；根有沙套；叶片质地坚硬；第一颖长13～17毫米，第二颖长8～15毫米，外秤长5～7毫米；芒长10～12毫米。

羽毛针禾产新疆，在新疆主要分布在准噶尔盆地的古尔班通古特沙漠中，其主要生于在荒漠中海拔400～1600米的沙地、沙丘和沙垄上，在哈巴河、布尔津、乌苏、精河、沙湾、玛纳斯、呼图壁、昌吉、米泉、奇台等县市及塔里木盆地均有分布；在中亚和欧洲也有分布。它抗早、耐风蚀、耐沙埋，是固定流沙地不可多得的一种固沙植物。

沙漠环境十分严酷，植物种类贫乏,羽毛针禾是沙漠里的先锋植物，它在10～50m高的半流动新月形沙丘向风坡面，以及10～30m高的半固定沙丘顶部，随着沙丘进入半固定状态，在向风坡面下部，羽毛针禾是白杆沙拐枣与沙生草本群落中的重要伴生种，具有优良的沙地生态保育意义。羽毛针禾萌发早，冬季枝叶枯而不落，更是春季家畜恢复体膘和冬季放牧利用的重要牧草植物。羽毛针禾根有沙(砂)套，能保护根系，使其耐热性增强，在植株基部形成不同高度的风积沙堆、起固沙作用。在沙漠环境下，羽毛针禾这种套结构更像是其根部的一个保护伞，使羽毛针禾可以适应沙漠这种干旱恶劣的环境。羽毛针禾生长在流动和半流动沙丘上，一旦沙丘成为固定沙丘则不再有羽毛针禾，所以有人叫它沙漠里的“雷锋”，专为固定沙丘所生。同时，羽毛针禾的根多集中生长在沙丘浅层，在流动和半流动沙丘上由于风蚀，羽毛针禾的根经常暴露在沙丘表面，夏季沙漠表面温度很高(50℃左右)，而羽毛针禾的根可以正常工作，所以有人推测其沙套结构保护了根部度过炎热的夏季。

固沙植物羽毛针禾有着巨大的研究价值和潜力，由于羽毛针禾生长地域环境及难以在实验室进行人工种植的关系，到目前为止都是基于野外生存环境下对羽毛针禾生态学方面和根部微生物环境进行的研究，现在亟需在室内环境利用分子生物学手段对羽毛针禾抗旱固沙保水的机制进行更进一步的深入探究。植物组织培养技术是分子生物学研究中非常重要的技术，其中愈伤组织的获得是植物组织培养体系中的关键环节。到目前为止还没有关于羽毛针禾组织培养的相关报道，本发明利用羽毛针禾成熟胚组织成功获得大量愈伤组织，不但有助于羽毛针禾遗传转化体系的建立，对羽毛针禾的深入研究也有非常重要的意义，并为以后羽毛针禾快速繁殖及改良沙漠环境，恢复沙漠生态的工作打下坚实基础。

发明内容

为实现上述目的，本发明的目的在于提供一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法，包括如下步骤：

(1)将从野外收取的羽毛针禾的种子烘干后去除颖果果皮；

(2)用2ml离心管，在无菌操作台上用无菌水冲洗4～5次；

(3)用体积浓度75％的乙醇水溶液浸泡60～120s，期间摇晃离心管10～50次，之后用无菌水冲洗4～5次；

(4)再用体积浓度10％的次氯酸钠浸泡8～12min，期间摇晃离心管10～50次，之后用无菌水冲洗6～8次；