[发明专利]一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法

权利要求书

1.一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将从野外收取的羽毛针禾的种子烘干后去除颖果果皮；

(2)用离心管，在无菌操作台上用无菌水冲洗4～5次；

(3)用体积浓度75％的乙醇水溶液浸泡60～120s，期间摇晃离心管10～50次，之后用无菌水冲洗4～5次；

(4)再用体积浓度10％的次氯酸钠浸泡8～12min，期间摇晃离心管10～50次，之后用无菌水冲洗6～8次；

(5)继续在无菌台内，将步骤(4)获得的种子均匀摆放到有pH是5.8～6的MS培养基或者是有诱导培养基的平板内，在27～29℃黑暗预培养3～7天；

所述诱导培养基使用以下方法制备：以pH是5.8～6的MS为基础培养基，添加2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的浓度为1～2mg/L、酪蛋白水解产物45～55mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25-30g/L，配制得到诱导培养基；

(6)在无菌台内，将步骤(5)中预培养得到的种子用剪刀剪碎，或者使用涂布器下端在2ml离心管中碾压，得到种子碎片，后将碎片移至诱导培养基中，在27～29℃暗培养，至长出愈伤组织；

所述诱导培养基使用以下方法制备：以pH是5.8～6的MS为基础培养基，添加2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的浓度为1～2mg/L、酪蛋白水解产物45～55mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25-30g/L，配制得到诱导培养基；

(7)挑取步骤(6)得到的愈伤组织并放入扩大培养基中继续培养，得到大量羽毛针禾愈伤组织，

所述扩大培养基通过以下方法制备：以pH是5.8～6的MS为基础培养基,添加2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的浓度为0.25～1mg/L、酪蛋白水解产物50～100mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25-30g/L。

2.如权利要求1所述的一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法，其特征在于：所述种子选用直接从野外收取的羽毛针禾的种子。