[发明专利]V5V6区引物解析植物内生细菌菌群的方法

权利要求书

1.用于解析植物内生细菌菌群的引物对，其特征在于：

所述引物对的靶序列为细菌16S rDNA的V5-V6区的全长或部分；

所述引物对由引物甲和引物乙组成，所述引物甲是核苷酸序列如序列表中序列1所示的单链DNA分子，所述引物乙与植物线粒体18S rDNA对应，且所述引物乙的3’末端与所述植物线粒体18S rDNA有3个连续的差异核苷酸，且所述引物乙全长与所述植物线粒体18SrDNA的差异核苷酸大于等于4个，所述引物乙除所述差异核苷酸外，其它核苷酸与所述植物线粒体18S rDNA的相应核苷酸相同或互补；

所述引物乙是核苷酸序列如序列表中序列2所示的单链DNA分子。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于：所述引物甲和所述引物乙的摩尔比为1∶1。

3.用于解析植物内生细菌菌群的试剂，其特征在于：包括权利要求1或2所述引物对和具有热启动活性且没有3’→5’外切酶校正活性的DNA聚合酶。

4.用于解析植物内生细菌菌群的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述引物对或权利要求3所述的试剂。

5.权利要求1或2所述引物对或权利要求3所述的试剂或权利要求4所述试剂盒在解析植物内生细菌菌群中的应用；

或，权利要求1或2所述引物对或权利要求3所述的试剂或权利要求4所述试剂盒在制备解析植物内生细菌菌群产品中的应用。

6.权利要求1或2所述引物对或权利要求3所述的试剂或权利要求4所述试剂盒在避开植物宿主DNA污染且获得植物内生细菌菌群16S扩增子中的应用；

或，权利要求1或2所述引物对或权利要求3所述的试剂或权利要求4所述试剂盒在构建植物内生细菌菌群测序文库中的应用；

或，权利要求1或2所述引物对或权利要求3所述的试剂或权利要求4所述试剂盒在植物内生细菌菌群测序中的应用。

7.根据权利要求5或6所述应用，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述单子叶植物为水稻、玉米、小麦、大麦；

所述双子叶植物为柑橘、番茄、拟南芥、大豆、花生。

9.一种解析植物内生细菌菌群的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待测植物组织总DNA，用权利要求1或2所述引物对和具有热启动活性且没有3’→5’外切酶校正活性的DNA聚合酶扩增，得到PCR扩增产物；

2)对所述PCR扩增产物进行测序，根据测序结果鉴定待测植物组织内生细菌菌群，从而解析植物组织内生细菌菌群结构。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：

所述单子叶植物为水稻、玉米、小麦、大麦；

所述双子叶植物为柑橘、番茄、拟南芥、大豆、花生。