[发明专利]一种包括JEV抗原基因的重组载体、重组菌株和递呈JEV抗原的外膜囊泡及其应用

说明书

本发明提供了一种包括JEV抗原基因的重组载体、重组菌株和递呈JEV抗原的外膜囊泡及其应用，属于免疫学技术领域，所述包括JEV抗原基因的重组载体，包括JEV抗原基因和pBAD‑18‑ClyA初始载体；所述重组菌株包括上述重组载体，并且能够生产递呈JEV抗原的外膜囊泡；方法如下：1)将重组菌株进行液体培养；2)将预培养菌液转接入诱导液体培养基中进行诱导培养，离心；3)将上清液依次进行过滤除菌体、超滤浓缩和离心，收集固相组分，获得递呈JEV抗原的外膜囊泡。所述递呈JEV抗原的外膜囊泡能够激发高效的特异性免疫反应，具有优秀的抗原性，能够产生较高的特异性抗体，既能引发体液免疫又能引发细胞免疫。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种包括JEV抗原基因的重组载体、重组菌株和递呈JEV抗原的外膜囊泡及其应用。

背景技术

日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)又称流行性乙型脑炎，简称乙脑，是由黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)的日本乙型脑炎病毒(JEV,Japaneseencephalitis virus)引起的威胁人畜健康的急性中枢神经系统传染病，是重要的人畜共患病及虫媒病毒病。临床中，人体感染该病后发病较迅速，会出现高热不退、意识障碍、惊厥、强直性痉挛和脑膜刺激征等特征症状，感染严重者往往愈后会留下意识障碍、痴呆、失语及肢体瘫痪、癫痫等后遗症。动物中以猪的感染最为普遍，感染后发展成为本病的传染源，但其临床症状不明显，死亡率较低。妊娠母猪在感染后可能突发流产，产出死胎、木乃伊和弱胎，同胎也见正产胎儿，后备母猪无明显异常表现，而公猪除有一般症状外，常发生一侧性睾丸肿大及炎症，也偶有两侧同时病变。由于该病隐性感染机会多，所以乙型脑炎病毒至今仍是一个具有重要临床意义和全球性意义的病原体。

基因工程亚单位疫苗(Sub-unit vaccine)也称生物合成亚单位疫苗/重组亚单位疫苗。有研究报道证明，基于E蛋白或NS1蛋白研制的JEV亚单位疫苗能够产生较好的保护效果。该类疫苗具有较高的安全性，不会感染动物产生副作用，是乙脑疫苗发展的新方向，世界范围内众多研究机构都正致力于该方向的探索。

外膜囊泡(Outer Membrane Vesicles,OMV)主要由革兰氏阴性菌外膜在一定的机制下发生出芽并在细菌表面形成的一种包含生物学活性物质的直径约在20～250nm之间的囊泡状结构。成分主要含细菌外膜及周质，包括非蛋白抗原脂多糖(LPS)，磷脂(PL)，膜蛋白，毒素，侵袭素等致病因子。其生物学功能包括：1.有助于生物膜的形成；2.分泌系统替代；3.物质传输；4.遗传物质转移；5.保护毒力相关因子等，而最重要的是，其作为细菌衍生产品，可诱导机体产生有效的免疫应答。

目前尚没有高效的递呈JEV抗原的外膜囊泡。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种包括JEV抗原基因的重组载体、重组菌株和递呈JEV抗原的外膜囊泡；所述重组菌株能够成功表达JEV抗原，并能够生产递呈JEV抗原的外膜囊泡；所述递呈JEV抗原的外膜囊泡能够激发高效的特异性免疫反应，具有优秀的抗原性，能够产生较高的特异性抗体，既能引发体液免疫又能引发细胞免疫。

本发明的另一个目的在于提供上述递呈JEV抗原的外膜囊泡在制备流行性乙型脑炎疫苗中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种包括JEV抗原基因的重组载体，包括JEV抗原基因和pBAD-18-ClyA初始载体；所述JEV抗原基因插入在pBAD-18-ClyA初始载体的Xba I酶切位点和Hind III酶切位点之间。

优选的，所述JEV抗原基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

本发明提供了一种包括JEV抗原基因的重组菌株，所述重组菌株包括上述的重组载体。