[发明专利]一种包括JEV抗原基因的重组载体、重组菌株和递呈JEV抗原的外膜囊泡及其应用

权利要求书

1.一种包括JEV抗原基因的重组载体，其特征在于，包括JEV抗原基因和pBAD-18-ClyA初始载体；所述JEV抗原基因插入在pBAD-18-ClyA初始载体的XbaI酶切位点和Hind III酶切位点之间。

2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述JEV抗原基因的核苷酸序列如SEQID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

3.一种包括JEV抗原基因的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株包括权利要求1或2所述的重组载体。

4.一种由权利要求3所述的重组菌株生产的递呈JEV抗原的外膜囊泡。

5.权利要求4所述的递呈JEV抗原的外膜囊泡的制备方法，包括以下步骤：

1)将权利要求4所述的重组菌株接种于液体培养基中进行培养至菌液的OD₆₀₀为0.4～0.6获得预培养菌液；

2)将步骤1)中所述的预培养菌液转接入诱导液体培养基中进行诱导培养15～25h后，离心，收集上清液；

3)将步骤2)中所述的上清液依次进行过滤除菌体、超滤浓缩和离心，收集固相组分，获得递呈JEV抗原的外膜囊泡。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的液体培养基为氯霉素抗性LB液体培养基；步骤2)中所述的诱导液体培养基为添加20wt％的L-Arabinose溶液的氯霉素抗性LB液体培养基。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述超滤浓缩的截留分子量为100kDa。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤4)所述收集固相组分后，还包括将收集的固相组分进行重悬、密度梯度离心和收集获得递呈JEV抗原的外膜囊泡。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述密度梯度离心采用OptiPrep-iodixanol梯度细胞分离液，所述密度梯度离心的离心力为140000～160000g，所述密度梯度离心的时间为10～14h。

10.权利要求4所述的递呈JEV抗原的外膜囊泡在制备流行性乙型脑炎疫苗中的应用。