[发明专利]一种牛的胚胎移植液及其使用方法

说明书

本发明公开了一种牛的胚胎移植液及其使用方法，牛的胚胎移植液包括SOF基础培养基，还包括以下添加剂：4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠、胰岛素‑转铁蛋白‑硒添加剂、β‑巯基乙醇、亚牛磺酸、1‑油酰基‑sn‑甘油‑3‑磷酸钠盐、L‑瓜氨酸和红景天苷。采用本发明的胚胎移植液可有效提高牛胚胎移植后的怀孕率。

技术领域

本发明涉及家畜胚胎工程技术领域，更具体的说是涉及一种牛的胚胎移植液及其使用方法。

背景技术

家畜胚胎移植是一项具有潜在研究价值和商用价值的技术，可广泛应用于体外胚胎移植、动物基因编辑育种及优良家畜品种扩增等方面。但由于实验室位置，养殖场牛舍限制以及实际需求，在移植胚胎时一般需要一定距离的运输才行，胚胎长时间暴露在空气中，会由于pH的变化以及空气中的高含氧量对胚胎产生损害，影响胚胎在植入后的发育。

因此，提供一种牛的胚胎移植液，减少胚胎在运输过程中所带来的损伤是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种牛的胚胎移植液及其使用方法，能够减少胚胎在运输过程中所带来的损伤。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种牛的胚胎移植液，包括SOF基础培养基，还包括以下添加剂：4-羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、β-巯基乙醇、亚牛磺酸、1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐、L-瓜氨酸和红景天苷。

4-羟乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氢钠用来维持胚胎移植液的pH值；胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂(ITS-G)能够较好的维持细胞的体外存活和增殖；β-巯基乙醇可促进细胞增殖，减缓细胞衰老速率，抵抗高氧环境引起的氧化损伤，利于细胞的生长；亚牛磺酸能中和细胞毒素乙醛-过氧化级联反应的最终物质,从而限制ROS的有害作用；1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠能够促进细胞增殖；红景天苷具有提高细胞活力，改善细胞形态，减少胞核凝集，抗细胞氧化应激的保护作用。

八种添加剂添加到胚胎移植液中，可有效降低牛胚胎的酸碱损伤和氧化损伤，提高牛移植后胚胎的发育率和发育质量。

进一步，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸浓度为1-3mg/mL，碳酸氢钠浓度为0.1-0.2mg/mL，胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂体积分数为0.1-2％，β-巯基乙醇浓度为10-200μM，亚牛磺酸浓度为1-10mM，1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐浓度为0.1-1μg/mL，L-瓜氨酸浓度为：0.01-0.03mg/mL，红景天苷浓度为0.01-0.2mM。

进一步，所述胚胎移植液还包括必需氨基酸、非必需氨基酸和无脂肪酸牛血清白蛋白。

通过控制必需氨基酸、非必需氨基酸及无脂肪酸牛血清白蛋白可进一步提高牛胚胎体外发育质量。

进一步，所述必需氨基酸体积分数为0.1-2％，非必需氨基酸体积分数为0.1-2％，无脂肪酸牛血清白蛋白浓度为1-10mg/mL。

进一步，每100mL所述SOF基础培养基包括26.168mg CaCl₂·2H₂O、9.999mgC₆H₅Na₃O₇·2H₂O、2.923mg谷氨酰胺、37.218mg MgSO₄·7H₂O、49.904mg肌醇、1.000mg酚红、53.378mg KCl、16.195mg KH₂PO₄、4.402mg丙酮酸钠、629.399mg NaCl和0.0757mg乳酸钠。

进一步，所述胚胎移植液还包括12μg/mL庆大霉素和12μg/mL头孢霉素。