[发明专利]密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因及其应用有效
| 申请号： | 201910543766.7 | 申请日： | 2019-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN110257406B | 公开（公告）日： | 2022-07-22 |
| 发明（设计）人： | 许蓉芳;魏鹏程;李娟;秦瑞英;李浩;刘小双;徐善斌 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院水稻研究所 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 刘兵 |
| 地址： | 230031 安徽省合肥市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 密码子 植物 改造 plant nme2cas9 基因 及其 应用 | ||
1.一种密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因，其特征在于，所述密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
2.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒含有权利要求1所述的密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因。
3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体插入有权利要求1所述的密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因或权利要求2所述的表达盒。
4.一种打靶载体，其特征在于，该打靶载体插入有权利要求1所述的密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因或权利要求2所述的表达盒。
5.一种转基因细胞，其特征在于，所述转基因细胞以大肠杆菌和/或根癌农杆菌作为宿主细胞，转入有权利要求1所述的密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因、权利要求2所述的表达盒、权利要求3所述的表达载体或权利要求4所述的打靶载体。
6.权利要求1所述的密码子植物化改造的Plant Nme2Cas9基因、权利要求2所述的表达盒、权利要求3所述的表达载体、权利要求4所述的打靶载体或权利要求5所述的转基因细胞在水稻基因组编辑中的应用，其中，所述水稻基因组编辑包括对水稻基因组进行剪切，获得含有突变位点的转基因水稻或水稻部分。
7.根据权利要求6所述的应用，其中，所述水稻为粳稻。
8.根据权利要求6所述的应用，其中，所述水稻为粳稻日本晴。
9.一种获得含有突变位点的转基因水稻或水稻部分的方法，其特征在于，该方法包括：
（1）将权利要求4所述的打靶载体转化根癌农杆菌，获得根癌农杆菌的转基因细胞；
（2）将水稻胚在愈伤组织诱导培养基上进行诱导，以获得次级愈伤组织；
（3）将所述根癌农杆菌的转基因细胞与所述次级愈伤组织接触并侵染，将侵染结束后的次级愈伤组织进行共培养，以获得共培养后的次级愈伤组织；
（4）对所述次级愈伤组织依次进行筛选、成苗并生根处理。
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