[发明专利]ND4基因重组腺相关病毒载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种包含ND4基因表达盒的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体的骨架为pAAV9，所述ND4基因表达盒包含人ND4基因或优化的人ND4基因。

2.如权利要求1所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述ND4基因表达盒从N端至C端依次包含启动子、线粒体靶向序列、人ND4基因或优化的人ND4基因、和/或UTR序列。

3.如权利要求2所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述启动子为CMV启动子或CAG启动子；所述启动子的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7所示。

4.如权利要求2所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述线粒体靶向序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示；和/或，所述UTR序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

5.如权利要求2所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述人ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述优化的人ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11所示。

6.如权利要求2所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述ND4基因表达盒的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示；或者所述ND4基因表达盒的核苷酸序列从N端至C端依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQID NO:9、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或依次为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6。

7.一种转化体，其特征在于，将如权利要求1～6任一项所述的重组腺相关病毒载体导入宿主，并使之整合在所述宿主的基因组上；较佳地，所述宿主为哺乳动物细胞；更佳地，所述哺乳动物细胞为HEK293细胞。

8.一种制备如权利要求1～6任一项所述的重组腺相关病毒载体的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：将所述ND4基因表达盒插入到腺相关病毒载体pAAV9中即得。