[发明专利]结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC，其特征在于，其包括顺次连接的2个EAST6蛋白和2个CFP10蛋白，所述顺次连接的顺序如下：EAST6-EAST6-CFP10-CFP10；

所述融合蛋白EECC的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码权利要求1所述重组融合蛋白EECC的核酸。

3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，其核苷酸序列为如下任一种：

（1）如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列或其互补序列；

（2）如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列经一个或多个核苷酸的替换得到的编码相同功能蛋白的核苷酸序列；

（3）与如SEQ ID NO.4所示的核苷酸具有至少80%同源性的核苷酸序列。

4.含有权利要求2或3所述核酸的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括表达盒、载体、转座子、宿主细胞、工程菌或转基因细胞系。

5.权利要求1所述的结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC在制备用于结核病免疫学诊断、结核病辅助诊断或结核菌潜伏感染筛查的试剂或试剂盒中的应用。

6.权利要求2或3所述的核酸或权利要求4所述的生物材料的如下任一种应用：

（1）在制备结核分枝杆菌融合蛋白中的应用；

（2）在制备用于结核病免疫学诊断、结核病辅助诊断或结核菌潜伏感染筛查的试剂或试剂盒中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述免疫学诊断包括皮肤试验、细胞因子释放试验或血清学诊断。

8.一种用于诊断结核分枝杆菌感染的试剂或试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC。

9.权利要求1所述结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC的制备方法，其特征在于，包括：将编码所述结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC的核酸导入宿主细胞中进行表达。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为原核细胞。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述原核细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。

12.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）构建携带编码所述结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC的核酸的表达载体；

（2）将所述表达载体导入所述宿主细胞中，经筛选获得携带所述表达载体的阳性宿主细胞；

（3）培养所述阳性宿主细胞，表达所述结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC；

（4）结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC的提取和纯化。