[发明专利]用于转基因水稻筛查的通用阳性标准质粒及其构建方法有效
| 申请号： | 201910538395.3 | 申请日： | 2019-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN110229846B | 公开（公告）日： | 2020-08-18 |
| 发明（设计）人： | 马卉;汪秀峰;张秀杰;许学;李夏莹;焦小雨;陈子言;赵伟 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院水稻研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;张瑞雪 |
| 地址： | 230031 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 转基因 水稻 通用 阳性 标准 质粒 及其 构建 方法 | ||
1.一种用于转基因水稻筛查的通用阳性标准质粒，包括载体骨架和筛选元件，其特征在于，所述的筛选元件由CaMV35S启动子、Ubiquitin启动子、NOS终止子、CaMV35S终止子、Bar基因、HPT基因、Bt基因、SPS基因和PLD基因组成；
所述的SPS基因选自SEQ ID No.8或SEQ ID No.9所示的核苷酸序列中的任何一种或两种；
所述CaMV35S启动子的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示；所述Ubiquitin启动子的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示；所述NOS终止子的核苷酸序列SEQ ID No.3所示；所述CaMV35S终止子的核苷酸序列为SEQ ID No.4所示；所述Bar基因的核苷酸序列为SEQ ID No.5所示；所述HPT基因的核苷酸序列为SEQ ID No.6所示；所述Bt基因的核苷酸序列为SEQ ID No.7所示；所述PLD基因的核苷酸序列为SEQ ID No.10所示。
2.按照权利要求1所述的通用阳性标准质粒，其特征在于，所述的筛选元件由CaMV35S启动子、Ubiquitin启动子、NOS终止子序列、CaMV35S终止子、Bar基因、HPT基因、Bt基因、SPS基因和PLD基因序列依次进行连接组成。
3.按照权利要求2所述的通用阳性标准质粒，其特征在于，将CaMV35S启动子、Ubiquitin启动子、NOS终止子序列、CaMV35S终止子、Bar基因、HPT基因、Bt基因、SPS基因和PLD基因序列依次进行连接得到的融合基因的核苷酸序列为SEQ ID No.11所示。
4.权利要求1所述的通用阳性标准质粒的构建方法，其特征在于，包括：将CaMV35S启动子、Ubiquitin启动子、NOS终止子、CaMV35S终止子、Bar基因、HPT基因、Bt基因、SPS基因和PLD基因拼接在一起后得到融合基因；将该融合基因连接到载体骨架上得到重组质粒；将重组质粒转化大肠杆菌受体菌，即得。
5.按照权利要求4所述的构建方法，其特征在于，将CaMV35S启动子、Ubiquitin启动子、NOS终止子、CaMV35S终止子、Bar基因、HPT基因、Bt基因、SPS基因和PLD基因依次拼接在一起后得到的融合基因的核苷酸序列为SEQ ID No.11所示。
6.按照权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述的载体骨架是pUC18质粒。
7.权利要求1-3任何一项所述的通用阳性标准质粒在转基因水稻定性筛查、检测和监测中的应用。
8.按照权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将权利要求1-3任何一项所述的通用阳性标准质粒作为转基因水稻检测用的阳性对照物质粒或阳性标准品，对待检测的水稻样品进行转基因成分的普通PCR和实时荧光PCR筛查检测。
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