[发明专利]一种Nrf2基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用

权利要求书

1.一个用于构建nrf2基因缺失的斑马鱼的靶序列，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID NO:1所示。

2.权利要求1所述靶序列在构建nrf2基因缺失的斑马鱼中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用CRISPR/Cas9技术和权利要求1所述靶序列，进行nrf2基因敲除。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 以权利要求1所述的靶序列为靶点，得到结构为T7启动子-靶点序列-gRNAscaffold的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，通过体外转录的方式得到带有nrf2靶点序列的gRNA；

S2. 通过体外转录得到Cas 9 mRNA

S3. 将带有nrf2靶点序列的gRNA和Cas 9 mRNA等体积混合，显微注射到斑马鱼的一细胞期的受精卵中；

S4. 受精卵培养至成鱼，得到F0代斑马鱼，鉴定F0代nrf2基因缺失的斑马鱼；

S5. 将得到的F0代nrf2基因缺失的斑马鱼与野生型斑马鱼交配的得到F1代斑马鱼，并鉴定F1代nrf2基因缺失的斑马鱼；

S6. 将得到的F1代nrf2基因缺失的斑马鱼自交得到F2代斑马鱼，并鉴定纯合的F2代nrf2基因缺失的斑马鱼。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤S1中，带有Nrf2靶点序列的gRNA其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.权利要求4中所述的带有Nrf2靶点序列的gRNA在构建Nrf2基因缺失的斑马鱼中的应用。