[发明专利]一种基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法及其应用

说明书

本发明提供一种基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法。所述鉴定黑果枸杞的DNA条形码基因序列为LRITS2(the second internal transcribed spacer，第二个核糖体RNA内转录间隔区)/LRpsbA‑trnH(叶绿体基因psbA和trnH之间的一段非编码区)。所述鉴定黑果枸杞的DNA条形码序列LRITS2/LRpsbA‑trnH可以同时应用或任选其中之一。本发明能高效、精准地鉴定黑果枸杞原料。防止类似的混淆品或伪品，同时，可用于果粉、果实碎末等的鉴定，为保障食品安全和消费者权益具有重要的应用价值和较大的社会效益。

技术领域

本发明涉及生物技术鉴定方法，具体涉及植物物种的生物技术鉴定方法，尤其涉及一种基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法及其应用。

背景技术

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium)多年生多棘刺灌木，主要分布于中国的陕西省北部、宁夏自治区、甘肃省、青海省、新疆自治区和西藏自治区，中亚、高加索和欧洲亦有分布。然而，市场上经常以喀什小檗(Berberiskaschgarica Rupr.)和白刺(Nitraria tangutorum Bobr.)的干果等冒充黑果枸杞。因此，为保障食品原料的安全和消费者的合法权益，对黑果枸杞的果实和果实粉末进行准确、有效地鉴定是极其有必要的。

植物DNA条形码分子鉴定技术是基于DNA条形码(基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列)来进行特种鉴定的一种分子生物学技术。它是传统的形态学鉴定方法的补充，能够在植物形态不完整或缺乏形态结构(如，粉末)时对植物进行精准和有效地鉴定。由于其具有进化速率快、易扩增的特点，核糖体中的ITS2(第二个核糖体RNA内转录间隔区)和叶绿体中的psbA-trnH(叶绿体基因psba和trnh之间的非编码区)序列已经被推荐为首先的植物DNA条形码序列，它们能够在特种水平上对植物进行有效、精准的鉴定《植物DNA条形码技术》(任保青等,2010)。

食品原料的准确的鉴定是安全生产、食品安全和消费者权益保障的基础。已有研究表明，ITS2序列在种级水平上鉴定植物的分辨率可达到92％以上，psbA-trnH序列的分辨率达到63％以上(Validation of the ITS2Region as a Novel DNA Barcode forIdentifying Medicinal Plant Species)(Species identification of Alnus(Betulaceae)using nrDNA and cpDNA genetic markers)。因此，结合ITS2和psbA-trnH序列能够有效、准确地对植物物种进行鉴定，可将ITS2和psbA-trnH序列作为黑果枸杞DNA条形码的标准序列。

在实际的生产中，本发明人在采购黑果枸杞原料时，经常遇到的问题是无法保证原料的完整性，这给原料的形态学鉴定带来了较大的困难。因此，探寻更科学、准确的鉴定方法是首要任务。以ITS2和psbA-trnH序列作为黑果枸杞鉴定的标准序列，并应用到其果实和果粉的鉴定，目前尚未见到相关的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计采用生物技术鉴定黑果枸杞的方法。

本发明提供一种基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法。

本发明所采用的技术方案是：

所述鉴定黑果枸杞的DNA条形码基因序列为LRITS2(the second internaltranscribed spacer，第二个核糖体RNA内转录间隔区)或LRpsbA-trnH(叶绿体基因psbA和trnH之间的一段非编码区)。

所述鉴定黑果枸杞的DNA条形码序列LRITS2/LRpsbA-trnH可以同时应用或任选其中之一。

具体的，本发明基于DNA条形码鉴定黑果枸杞的方法包括下列步骤：