[发明专利]识别肠癌血清标记物的核酸适配体及其筛选方法和用途

说明书

本发明涉及一种识别肠癌血清标记物的核酸适配体及其制备方法和应用，具体公开了四条核酸适配体的核苷酸序列及其筛选方法，首先收集首诊的肠癌患者及健康人血清样本，合成引物和初级文库ssDNA，以表面偶联羧基的磁性琼脂糖微球作为血清蛋白吸附载体，利用消减SELEX技术结合实时荧光PCR技术获取逐步富集的与肠癌血清蛋白特异性结合的核酸适配体序列。通过高通量测序、数据分析等方法筛选出四条特异性识别肠癌血清的核酸适配体。经验证本发明的四条核酸适配体对肠癌患者血清均具有亲和力高和特异性强的特点，在研究肠癌肿瘤标记物钓取、肠癌患者初筛和肠癌靶向性药物治疗方面有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种识别肠癌血清标记物的核酸适配体及其筛选方法和用途。

背景技术

肠癌是常见的恶性肿瘤，严重威胁着人类健康，其发病率仅次于肺癌、胃癌居第三位，给人们的生命和财产带来了巨大的威胁。对于肠癌疾病，威胁人类健康主要原因是发现较晚，缺乏对于高危人群的有效早期检测方法。如果能像常规体检一样以一种无痛方式确定出高危人群，就可以早期提供治疗的方法，提高其生存率。目前，肿瘤标志物的检测是实现肠癌早期诊断的重要手段，但现在仍然缺少有效特异的肠癌标志物。

核酸适配体是在体外通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)从人工合成的DNA或RNA文库中筛选出来的一小段寡核苷酸，具有高亲和力强特异性结合靶分子的优点，并且适配体分子量小，免疫原性低，化学修饰性强，应用领域广等。早期适配体的筛选多以单一蛋白为靶标进行筛选，但是以单一蛋白筛选在血清诊断及筛查的应用价值不高，因此，近年来运用复合靶标筛选适配体受到了广泛关注。复合靶筛选与常规的筛选不同之处是靶标不再是单一蛋白，而是复杂的多种蛋白，这就造成整个适配体筛选的过程更为复杂化。消减筛选是通过去除与非目标靶蛋白识别的一系列寡核苷酸，筛选出与非目标靶蛋白不结合但与目标靶蛋白特异性结合的核苷酸，然后再将其应用到后面来的实验中。这样将消减筛选应用到复合靶标筛选中会大大降低筛选的难度，从而提高成功率。另外筛选出来的适配体有非常广泛的应用前景，可以用来发现新的肿瘤标志物，还可以构建新型传感器等实现可视化检测。

发明内容

基于此，有必要针对现有技术中的不足，提供一种识别肠癌血清标记物的核酸适配体及其筛选方法和用途。

一种识别肠癌血清标记物的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列包括以下Seq 1-Seq 4中任意一种所示的DNA片段：

Seq-1：

5'-CTATAGCAATGGTACGGTACTTCCCCTTGTCGATTCATAATGTTCGTGGAACTCGCTCTCGGGACAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3'

Seq-2：

5'-CTATAGCAATGGTACGGTACTTCCTAACTCGTCCCTACCGAGCCTCTCTCTGGTCCTTGCAACTCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3'

Seq-3：

5'-CTATAGCAATGGTACGGTACTTCCTAGTTGAGCATTATACACATTGACTGGGCTGTTCTTCTGTCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3'

Seq-4：

5'-CTATAGCAATGGTACGGTACTTCCTGCTGGTTCGGCATGGCTTGCGACTGTCCCTGCGCATTTCCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3'。

在其中一个实施例中，所述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置通过磷酸骨架修饰、截断、延长、颠换、或对碱基进行化学修饰。