[发明专利]一种MGO-漆酶的制备方法在审
| 申请号： | 201910535153.9 | 申请日： | 2019-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN110195053A | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 乔维川;刘海;付博 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学;南京颐维环保科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N11/14 | 分类号： | C12N11/14;C12N9/02;C02F3/34;C01G49/08;C01B32/198;C02F101/38 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 漆酶 氧化石墨烯 制备 复合生物催化剂 枯草芽孢杆菌 氨基功能化 四氧化三铁 重复使用性 脱色 共价键合 固定能力 孔雀石绿 载体材料 共沉淀 固定化 交联剂 脱色率 染料 沉积 应用 改进 | ||
1.一种MGO-漆酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)通过改进的Hummers方法制备氧化石墨烯；
2)通过共沉淀技术制备磁性氧化石墨烯；
3)将磁性氧化石墨烯、漆酶溶液分散在柠檬酸磷酸盐缓冲液中，然后加入EDC和NHS，混合物150rpm振荡温育，共价交联，磁分离，得到MGO-漆酶；其中，柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的pH值为3～8，固定温度为5～55℃，温育时间为0.5～12h，漆酶溶液初始浓度为40～150μg/mL。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中磁性氧化石墨烯、漆酶溶液、EDC和NHS的质量体积比为2mg∶1mL∶2mg∶2mg。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)柠檬酸盐磷酸盐缓冲液的pH值为7，固定温度为25℃，温育时间为4h，漆酶溶液初始浓度为92.97μg/mL。
4.根据权利要求1-3任意一项所述方法制备的MGO-漆酶。
5.根据权利要求4所述的MGO-漆酶，其特征在于，所述漆酶来自枯草芽孢杆菌cjp3的CotA，以磁性氧化石墨烯为载体，通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺共价键合方法固定于所述磁性氧化石墨烯上，MGO-漆酶的负载范围为100～150mg/g，饱和磁化强度为27.7emug-1。
6.根据权利要求5所述的MGO-漆酶在孔雀石绿染料脱色中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：MGO-漆酶悬浮于孔雀石绿染料溶液中，混合物150rpm振荡温育，测定染料的吸光度；其中，混合物的pH值为3～8，温育温度为20～60℃，温育时间为0～5h。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，混合物的pH值为6，温育温度为30℃，温育时间为5h。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，固定化漆酶和孔雀石绿染料的质量比为20∶1。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，应用体系中加有25μMABTS介体。
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