[发明专利]一种Rochel反转录试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种Rochel反转录试剂，其特征在于：其中所使用的主料按重量计包括：去离子水2-3ml、EASY Dilution for Real Time PCR 1-2ml、gDNA Eraser 0.1-0.3ml、5 x gDNAEraser Buffer 0.2-0.4ml、RNase抑制剂0.03-0.05ml和基因引物0.3-0.5ml，所述基因引物包括端粒酶反转录酶0.05-0.1ml、酸甘油醛脱氢酶0.05-0.1ml、碱性磷酸酶0.04-0.06ml、核心结合因子0.04-0.06ml、骨涎蛋白0.03-0.05ml、骨钙素0.03-0.05ml、骨桥素0.02-0.04ml和Ⅰ型胶原蛋白0.02-0.04ml。

2.根据权利要求1所述的一种Rochel反转录试剂，其特征在于：所述基因引物中各引物序列具体如下：

端粒酶反转录酶：F:5’-TCTGGGATGCGAACGGGC-3’；R:5’-TCCGGCTCAGGGGCAGC-3’；

磷酸甘油醛脱氢酶:F:5’-GGAGTCCACTGGCGTCTTC-3’；R:5’–GCTGATGATCTTGAGGCTGTTG-3’

端粒酶反转录酶：F:5’-CTCGTTGACACCTGGAAGAGCTTCAAACCG-3’,R:5’-GGTCCGTCACGTTGTTCCTGTTCAGC-3’；

核心结合因子：F:5’-CACTATCCAGCCACCTTTAC-3’，R:5’-ATCAGCGTCAACATC-3’；

骨涎蛋白:F:5’-CATAGCCATCGTATCCTTGTCCT-3’,R:5’–CTATGGAGAGGACGCCACGCCTGG-3’；

骨钙素：F：5’-GCAGAGTCCAGCAAAGGGTG-3’，R：5’-GTCAGCAACTCGTCACAG-3’；

骨桥素:F:5’-CCAAGTAAGTCCAACGAAAG-3’,R:5’-GGTGATGTCCTCGTCTGTA-3’；

Ⅰ型胶原蛋白:F:5’-AGGGCTCCAACGAGATCGAGATCCG-3’,R:5’-TACAGGAAGCAGACAGGGCCAACGTCG-3’。

3.一种Rochel反转录试剂的制备方法，其特征在于：具体操作步骤为：

步骤一：使用干热灭菌法处理RNA实验专用玻璃容器，并使用0.1％的DEPC处理去离子水后对去离子水进行高温高压灭菌；

步骤二：将步骤一中制备的去离子水加入玻璃容器，并按比例加入EASY Dilution forReal Time PCR、gDNA Eraser、5 x gDNA Eraser Buffer和RNase抑制剂搅拌均匀，制得稀释溶剂；

步骤三：在步骤二中制备的稀释溶剂中按比例加入端粒酶反转录酶、酸甘油醛脱氢酶、碱性磷酸酶、核心结合因子、骨涎蛋白、骨钙素、骨桥素和Ⅰ型胶原蛋白轻轻搅拌，混合均匀后2000rpm离心20-30s，制得Rochel反转录试剂半成品；

步骤四：将步骤三中制备的Rochel反转录试剂半成品脱泡处理，利用超声波空化除泡，并对除泡后的反转录试剂保温处理，得到Rochel反转录试剂成品；

步骤五：取经过灭菌处理且无核酸酶的0.2ml离心管，使用注射器将步骤四得到的Rochel反转录试剂成品均匀注射到多个离心管内真空分装，并及时将分装好的Rochel反转录试剂低温存储。

4.根据权利要求3所述的一种Rochel反转录试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤一中RNA实验专用玻璃容器加热温度设置为180-190℃，所述加热时间设置为50-60min。

5.根据权利要求3所述的一种Rochel反转录试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤二中5 x gDNA Eraser Buffer使用前用Vortex震荡混匀，并使用离心机离心后使用。