[发明专利]一种核酸质谱检测标准品、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种核酸质谱检测标准品，含有多条至少由一种类型核苷酸合成的单链短核酸，其中单链短核酸为单磷酸脱氧核糖核苷酸dNMP或经过修饰的单磷酸脱氧核糖核苷酸ddNMP。本发明还公开核酸质谱检测标准品的制备方法，选取若干个核苷酸组成序列得到多条单链短核酸；将多条序列信息导入合成仪，进行序列合成，经过纯化后用C18柱浓缩、脱盐、沉淀，得到引物干粉；计算加水量，根据计算结果加水稀释，得到各单链核酸片段浓度；计算混合需要各单链核酸片段体积，将稀释后的单链核酸按计算的体积混合得到核酸质谱检测标准品。对核酸质谱进行调谐、调谐检验和基因分型检验，从而保证从核酸质谱仪安装调试到校验的每个过程都可以进行质控，保证仪器准确可靠。

技术领域：

本发明涉及生物质谱检测领域，具体讲是涉及核算质谱检测标准品、制备方法及其应用。

背景技术：

核酸质谱基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术，是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱，原理是将样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比(M/Z) 与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。

在核酸质谱仪安装完成后或定期检修时，需要对仪器进行调谐和测试，确保仪器的状态符合检测要求，才可以进行真实样本的检测。然而，目前国家标准品库没有用于校准和调试核酸质谱仪的标准品，为针对于核酸质谱的调谐和测试造成困难。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是，提供一种核酸质谱检测标准品及其制备方法，可以对核酸质谱进行调谐、调谐检验和基因分型检验，从而保证从核酸质谱仪安装调试到校验的每个过程都可以进行质控，保证仪器准确可靠。

本发明的技术解决方案是，提供一种核酸质谱检测标准品，含有多条至少由一种类型核苷酸合成的寡核苷酸。

作为优选，所述寡核苷酸为单磷酸脱氧核糖核苷酸dNMP或经过修饰的单磷酸脱氧核糖核苷酸ddNMP。

作为优选，所述多条寡核苷酸中至少有一条含有单磷酸脱氧核糖核苷酸，或者含有单磷酸脱氧核糖核苷酸及双脱氧核糖核苷酸混合。

作为优选，所述每条寡核苷酸分子量大于等于200Da。

进一步地，所述每条寡核苷酸之间的分子量最小差异为9Da。

本发明还提供另一种技术方案：核酸质谱检测标准品的制备方法，包含如下步骤：

(1)选取若干个核苷酸组成序列得到多条寡核苷酸；

(2)将多条寡核苷酸的序列信息导入合成仪，进行序列合成，经过纯化后用 C18柱浓缩、脱盐、沉淀，得到引物干粉；

(3)计算加水量，根据计算结果加水稀释，得到各寡核苷酸片段浓度；

(4)计算标准品混合物所需各寡核苷酸片段的体积，将稀释后的寡核苷酸按计算的体积混合得到核酸质谱检测标准品。

作为又一优选，所述步骤(2)中合成的寡核苷酸纯化方式为HPLC、PAGE、 RPC或者OPC。

进一步地，所述合成的寡核苷酸加入干扰盐离子，其中盐离子浓度可独立调节。

本发明还公开第三种技术方案，核酸质谱检测标准品的应用，所述核酸质谱检测标准品用于包含进行调谐、调谐检验和基因分型检验。

作为优选，应用核酸质谱检测标准品模拟核酸反应产物，与核酸反应产物同步或独立进行质谱检测，根据分子量大小，进行调谐、调谐检验和基因分型检验。