[发明专利]胸腺肽Tα-1的合成方法

说明书

本发明公开了一种胸腺肽Tα‑1的合成方法，包括以下步骤：1)按照Fmoc固相合成方法，逐个偶联氨基酸至固相载体上，合成侧链带保护基的5肽树脂；2)制备带Hmb保护基的7肽树脂；3)按照Fmoc固相合成方法继续偶联1～21位的残基，得到28肽树脂；4)28肽树脂裂解脱除C端树脂和所有保护基得到Tα‑l粗肽。本发明通过在23位Val引入Hmb保护基，可以有效减少肽链偶联过程中的β折叠，进而提高反应效率，只有选择在23位Val引入Hmb保护基，既节约了生产成本，又对改善β折叠有非常明显的效果，提高了产品的总收率和纯度；本发明方法制得的Tαl粗肽的HPLC纯度可以达到98％，只有很少量杂质，相对于现有技术，大大简化了后续纯化的难度，节约了纯化成本，有利于产业化应用。

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及一种未乙酰化的胸腺法新的合成。

背景技术

胸腺中包含多种激素，归属于α、β、γ三类，共同诱导T细胞的成熟分化。胸腺肽主要活性成份是由28个氨基酸组成的胸腺肽α1(Tα1)，化学合成的商品为N端乙酰化的胸腺肽α1(Tα1)——胸腺法新。其分子量为3108.28，分子式为C₁₂₉H₂₁₅N₃₃O₅₅，肽序列为N-Acetyl-Ser¹-Asp²-Ala³-Ala⁴-Val⁵-Asp⁶-Thr⁷-Ser⁸-Ser⁹-Glu¹⁰-Ile¹¹-Thr¹²-Thr¹³-Lys¹⁴-Asp¹⁵-Leu¹⁶-Lys¹⁷-Glu¹⁸-Lys¹⁹-Lys²⁰-Glu²¹-Val²²-Val²³-Glu²⁴-Glu²⁵-Ala²⁶-Glu²⁷-Asn²⁸-OH。在临床上经常将Tαl作为免疫增强剂或免疫调节剂用于各种免疫缺陷病和免疫受抑制疾病的治疗。

目前胸腺法新的合成方法主要采用Fmoc固相合成。由于胸腺法新是困难多肽，在合成过程中形成β折叠，导致合成困难。β-折叠的结构中，主链两侧存在大量的氢键。这些氢键可使肽链紧紧的聚集在一起。当β-折叠结构在整个主链中占得比例越大时，该肽的溶解性就越差。这种特征会造成接肽反应困难。且采用传统的Fmoc固相顺序偶联方法，纯度只能达到约50％，即使采用多肽片段原料进行偶联如专利CN201410333844，纯度也只有62～66％。较低的纯度会使产率降低和纯化困难，进而导致生产成本上升。

研究发现，骨架保护基能够打乱肽链的氢键，从而破坏β-折叠，进而改善肽的溶解性。但Dmb和Hmb等低活性骨架保护基的引入会使后续一个残基的偶联变得困难，特别是位阻较大的氨基酸，如缬氨酸Val，因此骨架保护基存在位点的限制。而高活性的Hmsb和Hnb等骨架保护基又涉及脱除步骤繁琐，以及各种副反应的发生，致使合成产物纯度并不高。

鉴于上述情况，本发明采用Fmoc固相合成，在23位Val引入骨架N修饰保护基Hmb，如此，合成的28肽粗肽得到了难得的98％纯度。

发明内容

为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种胸腺肽Tα-1的合成方法。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种胸腺肽Tα-1的合成方法，包括以下步骤：