[发明专利]一种用于提高细胞钙流荧光检测的方法

说明书

本发明公开了一种用于提高细胞钙流荧光检测的方法，包括以下步骤：准备细胞板：将HEK‑293‑Mu细胞和HEK‑293‑D2细胞分别以每孔80000个细胞的密度种在96孔板中，培育16~24小时；配制含苋红（Amaranth）缓冲液：取苋红粉末，溶解在高通量实时荧光检测（FLIPR）缓冲液中，得含苋红缓冲液，浓度范围为0.1 mg/mL~5 mg/mL；高通量实时荧光检测分析：将所述96孔板每个孔中加入100μL的荧光染料溶液，放入培养箱中37℃下温浴1h~4h后，将所述96孔板中的荧光染料溶液吸干，在每孔中加入100μL的所述含苋红缓冲液，进行高通量实时荧光检测分析。本发明操作过程中简单，有效增强了钙流信号、降低了背景信号，可用于高通量筛选。

技术领域

本发明属于细胞荧光检测领域，具体涉及一种用于提高细胞钙流荧光检测的方法。

背景技术

高通量筛选是药物发现中很重要的环节。在筛选分析过程中，细胞内钙离子的变化是广泛应用的监测细胞表面受体激活的有效指标。用于此技术的荧光标记物Calcium-6在和细胞内游离的钙离子结合后，它的荧光发射波长会发生变化。但是在实验过程中，常常会遇到荧光信号低、背景信号高等问题，严重影响结果判断。

发明内容

有鉴于此，本发明实施例期望提供一种用于提高细胞钙流荧光检测的方法，操作过程中简单，有效增强钙流信号、降低背景信号，可用于高通量筛选。

为达到上述目的，本发明采用一种用于提高细胞钙流荧光检测的方法，包括以下步骤：

a) 准备细胞板：将HEK-293-Mu细胞和HEK-293-D2细胞分别以每孔80000个细胞的密度种在96孔板中，培育16~24小时；

b) 配制含苋红缓冲液：取苋红粉末，溶解在高通量实时荧光检测缓冲液中，得含苋红缓冲液，浓度范围为0.1 mg/mL ~5 mg/mL；

c) 高通量实时荧光检测分析：将所述96孔板每个孔中加入100 μL的荧光染料溶液，放入培养箱中37℃下温浴1h~4h后，将所述96孔板中的荧光染料溶液吸干，在每孔中加入100μL的所述含苋红缓冲液，进行高通量实时荧光检测分析。

进一步地，所述96孔板为四周黑色，底部透明，预铺Poly-D-lysine。

进一步地，所述荧光染料溶液为Calcium-6溶液。

进一步地，所述步骤b)中配制含Amaranth缓冲液的浓度为0.5 mg/mL。

进一步地，所述步骤c)中放入培养箱中37℃下温浴1h。

本发明有益效果如下：本发明操作过程中简单，有效增强钙流信号、降低背景信号，可用于高通量筛选。

附图说明

图1为本发明一种用于提高细胞钙流荧光检测的方法流程示意图；

图2（A）为传统方法实施例（Calcium-6 Assay Kit）荧光强度在563-5021范围内高通量实时荧光检测分析图；

图2（B）为传统方法实施例（Calcium-6 Assay Kit）荧光强度在704-2000范围内高通量实时荧光检测分析图；

图3（A）为本发明实施例（Calcium-6 Assay Kit）荧光强度在563-5021范围内高通量实时荧光检测分析图；

图3（B）为本发明实施例（Calcium-6 Assay Kit）荧光强度在704-2000范围内高通量实时荧光检测分析图。

具体实施方式

为了能够更加详尽地了解本发明的特点与技术内容，下面对本发明的实现进行详细阐述。